its测序分析方法在鉴定临床酵母样真菌中的应用

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1、分类号Ｒ４４６．５学校代号１０５７２ＵＤＣ６１０密级学号２００９００１５户州中虔為夫＃＇－？Ｇｕａ打ｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ硕±学位论文人（兴同等学力申请硕±学位）ＩＴＳ测序分析方法在鉴定临床酵母样真茜中的应用学位申请人＾指导教师姓名周强专业名称中西医结合基栅申请学位类型科学学位论文提交日期２０１５年１１月广州中匡药大学学位论文原馈性声角本人郑重声

2、明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加Ｗ注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研巧做出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名±＿日期：２０１５年１１月２７日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部口机构送交论文的复印件和电子版，允许被査阅和

3、借阅。本人授权广州中医药大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可ｙＡ采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论义作者豁名论文导师签名日期：２０１５年１１月２７日摘要目的：本课题旨在建立适用于本实验室的临床常见酵母样真茜的ＩＴＳ基因检测方法，通过与质谱法、ＡＰＩ体系和念珠菌显色平板培养法相比，评价其临床应用价值。同时，初步探讨ＩＴＳ基因测序法直接检测临床标本的应用前景。方法：首先一Ｓ，设计对针对

4、多种常见酵母样真菌ＩＴ基因的通用引物，要求扩増的目的４００—６００ｂ片段的核酸序列具有种间多样性，能到达通过测序来区分片段长度约ｐ，不同种酵母样真菌的目的，收集１３５株临，并Ｗ１６标准菌株对引物进行测试。其次床的分离阳性菌株，同时用质谱法、Ａ門体系和念珠茜显色平板培养法方法进行检测。，比较各种鉴定方法的准确率和灵敏度最后，收集２０份经实验室常规鉴定的阳性临床标本，再用ＩＴＳ基因测序法直接进行鉴定。，评价测序分析法直接检测临床样本的鉴定效果结果：设计的ＩＴＳ基因扩増引物成功

5、扩增与鉴定出所有的标准菌株。对１３５株临床分离的阳性菌株的鉴定中ＩＴＳ、ＡＰＩ体系和念珠菌显色平板培养法方法阳，测序、质谱法性率分别为９８．５％（１３３／１％）７８．５％０６／１３５）５９．３％８０／１３５），（１，（，经巧检验分析，＝差异有统计学意义（於５１．９９６，八０．０５）。其中有１株ＭＳ未能鉴定的茜，经ＩＴＳ基因扩増测序后，鉴定为皮炎外瓶霉菌。运用ＩＴＳ测序方法还成功从２０份原始标本中一鉴定出致病酵母菌，与其他方法的检测结果致。结论：ＩＴＳ序列分析方法能

6、快速、准确地鉴定多种临床酵母样真菌。该方法在不经培养，直接从原始标本中进行检测及鉴定的方向上也有重要的应用前景一，是种可促进临床快速诊断致病真菌感染的方法。关键词：真菌Ｓ；测序；分子鉴定；ＩＴＩＡｐｐＩｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＩｎｔｅｒｎａｌＴ－ｒａｎｓｃｒｉｂｅｄＳｐａｃｅｒＲｅｇｉｏｎｓｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｙｅａｓｔ１ｉｋｅｆｕｎｇｉｈＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：Ｂａｓｉｃｄｉｓｃｉｐｌ

7、ｉｎｅｏ干ＣｉｎｅｓｅａｎｄｗｅｓｔｅｒｎｉｖｅｉｎｔｅｇｒａｔＡｕｔｈｏｒｉ：ＬａｎｇＺｈｅｎｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＺｈｏｕＱｉａｎｇＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔ：Ｔｈｅａｉｍｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｉｓｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｉ打ｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｓｐａｃｅｒ（ＩＴＳ）ｓｅｑｕｅｎｃｉｎ呂曲ｅｔｈｏｄｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｃｌｉｎｉｃａｌｌａｂａｎｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔ

8、ｈｉｓｍｅｔｈｏｄｉｎｃｏｍａｒｉｓｏｎｗｉｔｈｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏ打ａｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ西ｅｔｈｏｄｏｆｆｕｎｉｐｇｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｐｒａｃｔｉｃｅ．ＴｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｓｐｅｃｔｏｆＩＴＳａｓａｎｄｉｒｅｃｔｍｅｔｈｏｄｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｕｓｅｈａｓａｌｓｏｂｅｅｎｄｉｓｃｕｓｓｅｄｉ打ｔｈｉｓｓｔｕｄｙ．Ｍｅｔｈ