hsp90α参与ibdv感染鸡法氏囊细胞及其ibdv结合区的初步研究

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2、－：孙怀昌教授，扬州大学，江苏扬州，２２５００９／■申请学位级别：硕壬学科专业名称：预防兽医学；＾论文提交日期：２０１５年６月２０１５年６月论文答辩日期：？＜ｈ＞－？－：．■学位授予单位：扬州大学学位授予日期；２０１５年６月，；答辩委员会主席．身衣：郭爱珍教授次一？＾－？＇入．－．玄義．．，户‘－＝：：＾．ｖ．．Ａ媒．聲，义冷＾槪？＇＾．、．款第ｒ志迄苗寫ｉ公．於接讀：＾沁讀Ｉ、＇＇、＼户ｍ＞坏；＇、ｔ焉啤姑寺＾若劈藏＇、篇於？＞《５年６月产２；培第ｒ］：遲：＾＾如珠’．．．

3、、一，＇免＾，庆ｆｋ．．戸气＜，占：＊於：方．：＾１邵聪聪：Ｈｓｐ９〇ｇ参与旧ＤＶ感染鸡法氏囊细胞及其旧ＤＶ结合区的初步研究＿Ｈｓｐ９０ａ参与旧ＤＶ感染鸡法氏囊细胞及其旧ＤＶ结合区的初步硏究研究生：邵聪聪导：リ巧孙怀昌教棱摘要传染性法氏囊病（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｂｕｒｓａｌｄｉｓｅａｓｅ，旧Ｄ）是由传染性法氏囊病病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ一ｂｕｒｓａｌｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ，旧ＤＶ）引起的种急性、高度接触性传染病，Ｗ严重免疫抑制和青年一，对世界养禽业带来严重的损失鸡死ｔ率高为主要特征。病毒感染的第步是病毒与靴

4、细胞受体的结合－，因此研究旧ＤＶ受体对揭示病毒细胞相互作用非常关键。热应激蛋白９０ａｎ旧ＤＶ感染鸡成纤维细胞的受体之一（Ｈｅａｔｓｒｏｔｅ０ａＨｓａｈｏｃｋｐｉ９，ｐ９０）是细胞适应株或受体复合物成分，但在野毒株旧ＤＶ感染鸡法氏囊细胞中的作用尚不清楚。类弹性蛋白多狀Ｅｌｔ－ｌｉｋｔＥＬＰ）（ａｓｉｎｅｏｌｅｉｄｅ，ｐｙｐｐ，具有温度敏感可逆相变特性在低于其相变温度的溶液中呈溶解状态，高于相变温度的溶液中呈凝聚状态，因此可用简单的离也法进行其融合蛋白的分离纯化。本课题组将ＥＬＰ的相变特性与病毒受体结合特异性相结合，建立的病毒受体

5、结合捕捉技术可用于腺病毒的浓缩、纯化和监测。本研究利用相同原理，将鸡Ｈｓｐ９０ａ及其ｃＤＮＡ片段与ＥＬＰ进行融合表达，旨在探明Ｈｓｐ９０ａ的旧ＤＶ结合区，并为建立旧ＤＶ浓缩与纯化方法奠定基础。为了初步确定Ｈｓｐ９０ａ的旧ＤＶ结合区－ＰＣ民从鸡Ｈ，用ＲＴ胚成纤维细胞扩增ｓｐ９０ａ全长ｃＤＮＡ及其Ｎ端２８４个氨基酸编码序列和Ｃ端４４４个氨基酸编码序列，分别插入含ＥＬＰＥＴ－ＥＬＰ组质粒ＥＴ－ＥＬＰ－Ｈｓ９０ａＥＴ－ＥＬＰ－编码序列的原核表达载体ｐ；分别将重ｐｐ、ＰＮ２８４和°－ＥＬＰ－Ｃ４４４转化：ＢＬＲ（ＤＥ３）大肠杆菌，在２０Ｃ用ＩＰＴＧ

6、诱导重组蛋白表达ＰＥＴ，在优化条件下用ＥＬＰ的温度敏感逆向相变循环（ＩＴＣ）纯化融合蛋白；将纯化的融合蛋白与旧ＤＶＲＴ－ＰＣＲ检Ｈｓ。ＥＬＰＨ９０ａ僻育结合，用测病毒是否与重组ｐ９０ａ及其片段结合结果显示；与ｓｐ－Ｈｓ９０ａ和ＥＬＰ－Ｃ４４４及其片段融合蛋白均为可溶性表达；ＥＬＰｐ融合蛋白能与旧ＤＶ结合，－而ＥＬＰＮ２８４融合蛋白不能与旧ＤＶ结合，表明Ｈｓｐ９０ａ的旧ＤＶ结合区位于Ｃ端４４４个氨基酸区域。为了探明Ｈｓｐ９０ａ是否参与野毒株巧ＤＹ感染鸡法氏囊细胞，从ＳＰＦ鸡胚分离培养法氏囊细胞－ＰＣ艮和间接免疫巧光试验Ｈｓ９０ａ，分别用民

7、Ｔ检测ｐ表达，Ｗ法氏囊细胞系ＤＴ４０－细胞和成纤维细胞系ＤＦ１细胞为对照，结果显示法巧囊细胞系及原代细胞均表达Ｈｓｐ９０ａ扬州大学硕壬学位论文２＿分子；分别用重组Ｈｓｐ９０ａ巧育旧ＤＶ和Ｈｓｐ９０ａ抗体解育法巧裹细胞，间接免疫英光试验和病毒滴定检测结果显示重组Ｈｓｐ９０ａ及其抗体对出ＤＶ感染法氏囊细胞均有部分阻断作用，Ｈｓ９０ａ抗体的阻断作用较强９０ａ其中ｐ，与鸡ｓＩｇＭ抗体的阻断作用接近，提示Ｈｓｐ参一ｓ—与强毒株扭ＤＶ感染法氏囊细胞，但与ＩｇＭ样，不是旧ＤＶ感染法氏囊细胞的唯受体。ａ关键词：热应激蛋白９０；传染性法氏囊病

8、病毒；法氏