hcn4+窦房结细胞接触诱导cd117+心脏干细胞的实验研究

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1、1媒系考蹺硕士学位论文HCN4+窦房结细胞接触诱导CD117+心脏干细胞的实验研究DifferentiatingtheCD117+CardiacStemCellsviaContactwithHCN4+SinusNodeCells作者：薛成导师：张俊教授二〇一五年五月川北医学院硕士研究生学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注弓IM]的内容外’本论文不位含任何其他个人或集体已经发表或撰'弓的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体’均已在文屮以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外，本研究

2、己发表与未发表成果的知识产权均归屈川北医学院。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：二、r期：年JT月丨1川北医学院硕士研究生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使叫学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权川北医学院可以将本学位论文的伞部成部分内容编入有关数据库进行检索，

3、!{以釆丨丨j影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“厂，、1.保密•，在—年解密后适用本授权书。2.不保密中图分类号R363学校代码10634UDC616.1密级

4、授予单位川北医学院HCN4+窦房结细胞接触诱导CD117+心脏干细胞的实验研究DifferentiatingtheCD117+CardiacStemCellsviaContactwithHCN4+SinusNodeCells作者薛成导师张俊教授培养院系临床医学系授位类别学术学位授位级别硕士学科门类医学学科专业内科学研究方向心脏电生理与心律失常年级2012级学号201203012二○一五年五月致谢时光荏苒，转眼间硕士研究生学习即将结束，回首三年的求学历程，对那些帮助我、指导我、激励我的人，我心中充满了无尽的感激。首先，衷心感谢我的导师张俊教授。张老师渊博的知识、严谨的治学态度、缜密

5、的科研思维、不断求索的精神和高尚的医德都深深地影响着我，让我终生受益。再次感谢对我谆谆教导的张老师，并送上我诚挚的祝福！同时，衷心感谢川北医学院附属医院心内科所有老师对我实验和临床学习的关心和帮助。感谢分子生物研究所的敬保迁教授、胡为民教授以及王朝丽老师，感谢你们对我实验过程中的指导、支持和帮助。感谢陪伴我的师兄师姐、师弟师妹和同学们，同窗之谊，终生难忘。最后，感谢我的父母和家人，有您们的陪伴，我才能顺利的完成学业，愿您们健康幸福。HCN4+窦房结细胞接触诱导CD117+心脏干细胞的实验研究摘要目的：探讨HCN4+窦房结细胞接触诱导CD117+心脏干细胞后增强后者向窦房结样细胞分

6、化的可能性，初步分析分化机制，为生物起搏重建治疗缓慢型心律失常等疾病提供理论基础。方法：（1）采用消化法消化窦房结组织，制成细胞悬液，以HCN4为标记，采用磁珠分选法分选HCN4+窦房结细胞;（2）使用消化法消化心脏组织，获得细胞悬液，使用磁珠分选仪分选CD117+心脏干细胞;（3）使用transwell培养皿接触共培养HCN4+窦房结细胞及CD117+心脏干细胞，取诱导10天、20天及30天后的心脏干细胞，采用免疫荧光技术观察心脏干细胞分化情况；采用RT-PCR技术检测HCN2及HCN4的mRNA表达情况。结果：（1）以HCN4为标记，使用磁珠分选仪成功分选HCN4+窦房结细胞

7、，提高了窦房结细胞的纯度；（2）诱导10天后，心脏干细胞表达HCN2及HCN4的阳性率分别是5.2±3.4%、5.8±3.7%，诱导20天后上述蛋白阳性率为7.5±3.6%、7.1±3.5%，诱导30天后上述蛋白阳性率为10.2±3.8%、11.9±4.4%，其中诱导30天组与诱导10天组的标记物阳性率差异有显著统计学意义，P<0.05；利用RT-PCR技术对细胞中HCN2及HCN4的mRNA进行检测，结果显示：诱导10天、20天及30天后均有HCN2及HCN4的mRNA表达，且随时间增加表达量明显增加，差异有统计学意义，P<0.05。结论：（1）以HCN4为标记，通过磁珠分选仪

8、可以获得纯化的HCN4+窦房结细胞。（2）心脏干细胞可以分化为内皮样、心肌样和平滑肌样细胞，同时也具有分化为窦房结样细胞的潜力。（3）通过窦房结细胞接触诱导心脏干细胞，可以提高心脏干细胞分化为窦房结样细胞的效率。关键词：HCN4；CD117；窦房结细胞；心脏干细胞；分化DifferentiatingtheCD117+CardiacStemCellsviaContactwithHCN4+SinusNodeCellsAbstractObjectives:Toexplorewhethe