gegitk三基因缺失伪狂犬病病毒变异株的安全性和免疫原性评价

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1、分类号：Q959.7单位代码：10193密级：公开学号：2012622硕士学位论文gE/gI/TK三基因缺失伪狂犬病病毒变异株的安全性和免疫原性评价SafetyandImmunogenicityEvaluationofagE/gI/TKGene-deletedPseudorabiesVirus作者姓名：丛鑫学位类别：农学硕士专业名称：预防兽医学研究方向：动物疫病病原学指导教师：李影教授仇华吉研究员所在学院：动物科学技术学院2015年5月本研究由“国家自然科学基金项目（No.31200690）”资助FundedbyNationalNaturalScienceFound

2、ationofChina(No.31200690)独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即

3、：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要伪狂

4、犬病（Pseudorabies，PR），是由伪狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引起猪、羊等多种家畜和野生动物的以发热、奇痒（猪除外）、脑脊髓炎、呼吸系统和神经系统障碍为主要特征的一种传染病。疫苗接种是防治和根除PR的主要措施，经典的Bartha-K61株弱毒活疫苗在伪狂犬病的防控和根除中发挥了重要的作用。然而，2011年以来，在我国很多免疫过Bartha-K61弱毒疫苗的猪群中接连爆发了伪狂犬病新疫情。本实验室前期分离到一株PRV变异株（命名为PRVTJ株），致病性研究结果表明，与经典强毒株PRVSC株相比，TJ株的致病性明显增强。为了防控当

5、前爆发性流行的PR，本实验前期以PRVTJ株为亲本病毒，构建了gE/gI双基因缺失突变株rPRVTJ-delgE/gI，证明其在猪体上是安全的，且能对PRVTJ株的攻击提供快速、完全的保护。绵羊是评估伪狂犬病疫苗的动物模型，随后我们评价了rPRVTJ-delgE/gI在绵羊上的安全性。结果显示，rPRVTJ-delgE/gI接种的绵羊出现了PRV特征性的临床症状，甚至出现了死亡。说明rPRVTJ-delgE/gI存在一定的生物安全隐患。为了提高rPRVTJ-delgE/gI的安全性，本研究在此基础上，利用同源重组等方法进一步缺失了TK基因，构建了三基因缺失病毒rPR

6、VTJ-delgE/gI/TK，并对其进行了系列鉴定。结果显示，rPRVTJ-delgE/gI/TK在PK-15细胞上形成病毒蚀斑的速度、形态和大小与rPRVTJ-delgE/gI相似，二者的体外生长动力学均比亲本病毒PRVTJ株弱。随后对rPRVTJ-delgE/gI/TK在小鼠、绵羊及猪只上进行了安全性及免疫原性评价。结果显示，将rPRVTJ-delgE/gI/TK接种小鼠、绵羊及猪只后，均没有出现任何PRV特异性的临床症状及死亡。然而rPRVTJ-delgE/gI接种的小鼠及绵羊，出现了严重的瘙痒、神经症状及死亡。说明rPRVTJ-delgE/gI/TK对于易

7、感动物小鼠、绵羊和自然宿主猪的安全性明显高于rPRVTJ-delgE/gI。免疫原性研究结果显示，将rPRVTJ-delgE/gI/TK接种绵羊和猪只后，均产生了PRV特异性抗体，且与rPRVTJ-delgE/gI相当。rPRVTJ-delgE/gI/TK5、104TCID以1050/头的剂量免疫猪只后，能够抵抗PRVTJ株的攻击，攻毒保护效果与rPRVTJ-delgE/gI相近，说明TK基因的缺失没有改变rPRVTJ-delgE/gI的免疫原性。以上研究结果表明，rPRVTJ-delgE/gI/TK具有较高的安全性及免疫原性，有希望作为防控当前PRV流行的疫苗