folp1与folp2基因在磺胺甲恶唑—甲氧苄啶抗分枝杆菌中的作用机制研究

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1、令衅§在尤大七硕士学位论文论文题目与基因在磺腠甲恶唑甲氧苄咬抗分枝杆茵中的作用机制研免到天周作者姓名生物化学与分子生物学学科专业张天李研尧员导师姓名二〇一五年五月完成时间硕士学位论文与基因在磺胺甲恶唑甲氧苄啶抗分枝杆菌中的作用机制研究作者姓名：刘天周学科专业：生物化学与分子生物学导师姓名：张天宇研究员二一五年四月UniversityofScienceandTechnologyofChinaADissertationforMaster'sDegreeRoleoffolPIand/o/P2genesintheactionofsulfamethoxa

2、zole-trimethoprimagainstmycobacteriaAuthor'sName:TianzhouLiuSpeciality:BiochemistryandMolecularBiologySupervisor:PI.TianyuZhangFinishedtime:April,2015中国科学技术大学学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了明确的说明。作

3、者签名：签字日期：中国科学技术大学学位论文授权使用声明作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者授权中国科学技术大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权按有关规定向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文编入《中国学位论文全文数据库》等有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。公开口保密（—年）作者签名：女）》、导师签名：签字曰期：签字日期：摘要摘要结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病

4、。耐药的出现使得成为严重的公共卫生问题和社会问题，现有的抗药物已经不能满足需要，新药的研发显得更为迫切。然而新药的研发又需要耗费大量的时间与金钱，如果能利用已经应用于临床的药物来治疗，将使得药物的研发更加快速、便宜。磺胺甲恶唑在体内和体外均具有抗作用，是治疗耐药的候选药物之一。在临床上与甲氧苄啶（联合用于治疗细菌引起的呼吸道、泌尿道和胃肠道感染。研究发现与主要作用机制分别是靶向叶酸合成途径中的二氢蝶酸合酶（和二氢叶酸还原酶；但是与在分枝杆菌中的作用机制至今还未被阐明。本研究旨在探究分枝杆菌中与基因在抗分枝杆菌中的作用从而加速以为基础的抗新药的研

5、发。在分枝杆菌中基因编码，而基因编码的蛋白与其具有同源性。本研究通过在耻垢分枝杆菌中分别过表达和抱基因及敲除基因，得到重组菌株，和再通过固体平板法检测和对这些重组菌株的的最小抑制浓度（。结果发现在中过表达基因会使和的都增加倍；在中过表达基因会使和的都增加倍。另外，敲除的基因后，对其的降低至野生型的这可能是由于基因产物的存在减弱了的抑菌效果，暗示了抑制剂与联用时可能会有较好的抗效果。在本研究中我们也在尝试改进分枝杆菌基因敲除技术。由于生长缓慢，需要在实验室操作等原因，许多已存在的高效率的基因敲除技术都不能应用于。在过去年，虽然出现了大量的分枝杆菌

6、基因敲除技术，但这些技术，要么需要通过电转化将转入分枝杆菌体内，要么需要利用噬菌体作为载体将同源的递送到菌内，然后通过同源重组达到基因敲除的目的。分枝杆菌电转化效率低，再加上同源重组的低效率极大地限制了相关技术在分技杆菌中的应用，尤其是慢速分枝杆菌。即便是最近引入了重组工程的方法来增强重组效率，利用电转化获得基因敲除株的效率仍然很低；然而构建噬菌体的方法，需摘要要体外包装的步骤，不仅制备昂贵而且受到包装大小的更严格的限制。本研究通过改进的方法将等位交换底物（，插入分枝杆菌噬菌体基因组中构建重组噬菌体，进一步通过噬菌体可高效地将引入分枝杆菌中，从

7、而提高基因敲除效率。关键字：分枝杆菌，磺胺甲恶唑，甲氧苄啶，基因敲除，噬菌体ABSTRACTABSTRACTTuberculosis(TB)isachronicinfectiousdiseasecausedbyMycobacteriumtuberculosis(Mtb).Theemergenceofdrug-resistantMtbisanurgentmedicalandpublichealthconcernastheavailableanti-TBdrugsexhibitlimitedefficacy.Developmentofnewdrug

8、sisnotonlyaherculeantaskbutexpensive.However,ifalreadyexistingre-purposeddr