des和ee2抑制类精子发生可能的分子机制

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1、顼士学位论文DES和EE2抑制灸真精子发生可能的令子机制"V谭号指导教师：李英文教授专业名称：水生生物学研究方向：鱼类生理和分子内分泌学.：二•一五年四月独创性、声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆师范大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解重庆师范大学有关保留、使用

2、学位论文的规定，有权保留并向国家有部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权重庆师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。保密（），在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密�X(请只在上述一个括号内打“十’）学位论文作者签名：签字日期：6月丨o日重庆师范大学硕士学位论文DES和EE2抑制鱼类精子发生可能的分子机制硕士研究生：谭号指导老师：李英文教授专业名称：水生生物学所在学院：生命科学学院重庆师范大学二零一五年四月AThes

3、isSubmittedtoChongqingNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterMechanismsunderlyingdiethylstilbestroland17α-Ethynylestradiol-inducedinhibitionofspermatogenesisinfishCandidate:TanHaoSupervisor:LiYingwenProfessorMajor:HydrobiologyColle

4、ge:CollegeoflifesciencesChongqingNormalUniversityApril,2015重庆师范大学硕士学位论文中文摘要DES和EE2抑制鱼类精子发生可能的分子机制摘要为研究内分泌干扰物对鱼类下丘脑—垂体—性腺轴的影响，本研究首先用DES（0.1、1和10µg/L，暴露20d）对内分泌干扰研究的经典模式动物——斑马鱼（Daniorerio）雄性成鱼进行处理。组织学研究结果表明，DES能严重影响斑马鱼精子发生。同时，本研究克隆了斑马鱼与生殖细胞发育和减数分裂相关的vasa、dmc1的部分cDNA，

5、对其组织和细胞表达模式进行了研究。结果表明，vasa仅表达于精巢的精原细胞、初级精母细胞和卵巢不同时期的生殖细胞；而dmc1则表达于精巢精母细胞和卵巢卵母细胞发育早期。半定量PCR结果表明，DES处理后vasa的表达没有明显变化；而dmc1的表达则被明显抑制，且呈时间依赖性和剂量依赖性效应；转录因子dmrt1和雄激素合成关键酶基因P45011β的表达也被显著抑制，而雌激素合成酶关键基因cyp19a的表达上调。因此推测，DES可能通过抑制dmc1的表达阻碍了减数分裂；并通过抑制dmrt1的表达诱导了斑马鱼生殖细胞凋亡，而P45

6、011β的表达下调可能是间接原因。随后，为研究乙炔基雌二醇（EE2）是否能影响雄性黄颡鱼（Pelteobagrusfulvidraco）垂体中促性腺激素3个亚基基因的表达，从而干扰FSH和LH的分泌，采用末端快速扩增（RACE）的方法在黄颡鱼垂体中克隆了促性腺激素的2个β亚基（FSHβ和LHβ）的全长cDNA，对其组织表达模式和雌雄性垂体中的季节表达模式进行了研究；另外，用100ng/L的EE2对雄性黄颡鱼（2龄）进行了28天的暴露处理。结果发现，黄颡鱼FSHβcDNA全长528bp，ORF为399bp，编码132个氨基酸；

7、LHβ全长为870bp，ORF为417bp，编码138个氨基酸。序列分析结果表明，黄颡鱼FSHβ含有一个17氨基酸的信号肽，2个保守的N—糖基化位点和13个半胱氨酸残基，而LHβ含有一个18个氨基酸的信号肽，1个N—糖基化位点和12个半胱氨酸残基。进化分析显示，黄颡鱼FSHβ和LHβ与鲶形目的鱼类进化关系较近。组织分布结果发现，黄颡鱼3亚基均仅在垂体中表达。季节表达模式结果表明，雌雄黄颡鱼GtHα和LHβ表达水平在5月份左右达到最高，随后降低；FSHβ在雌性的表达模式与GtHα和LHβ相同，而在雄性，FSHβ的表达没有明显变

8、化。半定量RT-PCR结果显示，100ng/L的EE2能显著抑制黄颡鱼促性腺激素3个亚基基因的表达。因此，我们认为，EE2可能通过抑制黄颡鱼雄性垂体FSHβ和LHβ的表达，阻碍其正常的精子发生、精子成熟和排精过程，从而影响其正常的繁殖和发育。I重庆师范大学硕士学位论文中文摘要关键词：斑马鱼