cd4~+cxcr5~+cd57~+t细胞在肝癌发病中的作用及解毒抗癌方干预的研究

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1、暨南大学博士学位论文+++题名：CD4CXCR5CD57T细胞在肝癌发病中的作用及解毒抗癌方干预的研究+++Title:TheeffectandmechanismofCD4CXCR5CD57TcellsinhepatocellularcarcinomaandJieduAnticancerPrescriptionintervention作者姓名：赵昌林指导教师姓名陈孝银及学位、职称：博士教授学科、专业名称：中西医结合基础学位类型：学术学位论文提交日期：2015-6-29论文答辩日期：2015-6-02答辩委员会主席：

2、王新华论文评阅人：学位授予单位和日期：2015-6-28独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的

3、复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编：2暨南大学博士学位论文中文摘要背景：毒邪是癌症发病的中心环节，解毒抗癌法是中医治疗癌症的有效方法，解毒抗癌方对癌症的作用机制仍不清楚。滤泡性辅助性T细胞（Tfh）在B细胞的活化中起主要作用，在前期实验中我们

4、发现HBsAg和CD57有密切的关系，我们认为在人+++体中存在CD4CXCR5CD57T细胞亚群，而解毒抗癌方可以调节这一细胞亚群，在肝癌的治疗和预后中起着重要的作用。目的：解毒抗癌法是治疗癌症的有效方法，解毒抗癌方对癌症的作用机制有待阐明，+++本研究拟通过分析CD4CXCR5CD57T细胞在肝癌中的作用及对预后的影响，探讨+++解毒抗癌方的抗肿瘤作用和调节CD4CXCR5CD57T细胞的作用机制。方法:临床实验：按照方案筛选实验对象肝癌65例，32例健康志愿者作为对照组。肝癌手术标本行HE染色和免疫组化检测标

5、本中CD57、HBsAg、CXCR5等蛋白的表达；分离外周血中的淋巴细胞后加入荧光标记的CD57、CXCR5和CD4抗体，孵育后进行流+++式细胞检测，分析CD4CXCR5CD57T细胞的表达量；血清分离后，使用ELISA方法检测IL-21、IL-6、IFN-γ、CXCL13和CXCR5的浓度；使用生化检测仪分析血清中IgG、ALT、AST、胆红素的含量；PCR-荧光探针法检测肝癌组织中HBV-DNA表达量；采用荧光定量QPCR分析肝癌组织标本中IL-10、TGFB1、RORC、IL-17A、IL-21、IL-6、

6、CXCR5和CD57等基因的表达量。细胞实验：取健康脐带血或外周血进行淋巴细胞分离，IL-2(300U/ml)、IL-1α（100U/ml）、IL-21（40ng/ml）进行诱导，通过磁珠筛选进行分离，之后加入CD57、CXCR5和+++CD4荧光标记抗体，检测CD4CXCR5CD57T细胞表达量；取培养液0.5ml加入HpG2的细胞培养液中，比例为20%，在24-48小时后进行HpG2的凋亡检测。使用MTT法分析疏肝健脾方、解毒抗癌方、DDP对HpG2肿瘤细胞生长的抑制作用；分I暨南大学博士学位论文离细胞培养液，

7、使用ELISA检测L-21、IL-6、IFN-γ和CXCR5的含量。动物实验：昆明小鼠和C57BL/6购买自广东省医学实验动物中心，C57BL/6-HBV购买自上海南方模式生物研究中心，C57BL/6-Foxp3GFP购自TheJacksonLaboratory。H22肝癌细胞（广东省医学实验动物中心）左前臂腋窝处注射0.1ml，48小时后给与药物干预，干预时间为10d。各组小鼠处死后，取肝、肺和接种的瘤体进行常规HE染色和免疫组化染色分析CD57、CXCL13蛋白表达；无菌分离脾脏研磨分离淋巴细胞后+++进行CD

8、4CXCR5CD57T细胞的流式细胞检测；ELISA检测外周血IL-21、IL-6、IFN-γ、CXCR5和CXCL13的含量；PCR荧光探针法检测HBV-DNA表达量；荧光定量RT-PCR分析IL-10、TGFB1、RORC、IL-17A、IL-21、IL-6、CXCR5、CD57等基因的表达量。统计方法：使用SPSS(statisticspackagef