辅助性t细胞17在酒精性肝病中的作用及机制研究

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1、万方数据分类号：R65密级：题单位代码：学号：1031220092616南京医针犬掌博士学位论文(专业学位)万方数据南京医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：乡秒嘭日期：√掘，确，寥日导师躲了钦啊吼年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使

2、用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应；b-框内打“4”)：1、保密口，在一年解密后适用本授权书。2、不保密口。储躲奶吼鼢，砀谚日刷隧名。歹日期：年月目万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9一、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9二、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31一、}口7K⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯三、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46四、结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50五、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51综述及参考文献⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57攻读学位期间发表文章情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯86致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯87万方数据南京医科大学博士学位论文摘要背景：长期饮酒所引起的酒精性肝病(alcoholicliverdisease，ALD)已经成为我国人群慢性肝脏疾病的一个重要病因。辅助性T细胞17(helperTcells17，Thl7)是新近发现的一个CD4+T细胞亚群，在多种免疫相关性疾病中激活并通过招募相应免疫细胞和分泌相关细胞因子(主要是IL．17)等

5、方式发挥作用。本研究旨在通过改良小鼠胃造瘘模型研究Thl7及其相关细胞因子在ALD发生发展中的作用，并阐述其机制。方法：本研究使用成年(8周龄，体重20．25g)雄性ICR小鼠建立改良型小鼠胃造瘘模型并随机分为以下几组：对照组1(Con)，通过造瘘管生理盐水灌胃(30ml／kg·天，4周)；酒精性肝病组1—3(ALDl-ALD3)，60％酒精灌胃(30ml／kg·天)，时间分别为4、8、12周；酒精性肝病组4(ALD4)，酒精灌胃采用的方式与时间与ALD3组相同，第9周开始每周通过尾静脉分别注射含有1“g抗IL．17抗体的生理盐水

6、2009l。每组6只小鼠。建模完成后称取肝脏重量，计算肝重／体重比值；并收集各组小鼠血液标本及组织标本，评估各组小鼠肝脏组织学损伤情况，检测其肝功能、血浆细胞因子浓度、Thl7细胞百分比、Thl7相关转录因子mRNA浓度，进行组织标本二维差异凝胶电泳(two．dimensionaldifferencegelelectrophoresis，2D．DIGE)、质谱(massspectrometry，MS)确定差异蛋白并进行免疫印迹(westernblotting，WB)实验。结果：肝重／体重比值、肝酶及病理学检查发现随着ALD的进展，

7、小鼠肝脏炎症、坏死的程度逐渐加深，同时肝脏表现出现进行性纤维化。以抗IL．17处理有效减轻酒精灌胃12周小鼠的肝脏坏死和肝硬化水平，注射抗IL．17抗体对肝功能具有保护作用。与对照组相比，除TNF．Q外，酒精性肝病组小鼠各细胞因子在不同时相出现具有统计学差异的升高(除IL．23与IL．6的ALDl组外)；而TNF—a在ALDl上升后不同时相出现下降趋势，注射抗IL．17引起IL．1b、IL．10、TNF—a水平明显升高，而IL．6、IL．17A、IL．23水平明显降低，有统计学意义。慢性酒精灌胃转录因子Rorvt出现具有统计学差异

8、的升高，且这种升高呈现时间相关性；万方数据南京医科大学博士学位论文慢性酒精灌胃12周(ALD3)后IL．17、IL．21、IL．23等细胞因子转录水平明显升高，有统计学意义；注射含抗IL．17抗体的生理盐水抑制以上基因表达。Thl7细胞百分比随着A