b型流感嗜血杆菌结合疫苗结合及冻干制备工艺相关研究

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1、科学学位硕±学位论文单位代码:10678分类号:R387.4学号:2012028密级:兔略d种A常顿±学位论文?b型流感嗜血杆菌结合疫苗结合及冻干制备工芝相关研究院(系)所中国医学科学院医学生物学研究所研究生姓名王明清学科、专业生物化学和分子生物学学位类型科学学位指导教师廖国阳研究员二〇—五年五月尾略ft种A常硕±学位论文b型流感嗜血杆菌结合疫苗结合及冻干制备工艺相关研究研究生姓名王巧渣学科、专业年紛化挙巧分子半物学申请学位类型科学学化_

2、指导教师巧国旧研究员_导师小组失义勇寸怡颁二0—五年五月完成日期兔巧6种A掌研究生学位论文研究撰写声明本人郑重声明:本学位论文是我本人在导师指导下,独立进行学位巧题研究所取得的研究成果。论文中除待别加W标注和致谢的地方外,不包含他人或其他机构己经发表或撰写过的研究成果。对本研究和论文做过贡献的同道我均在论文中作了明确的说明并表明谢意一。该学位论文资料若有不实之化本人愿承担切相关责任。论文作者(签名勺年月曰少ZX/免巧6种A掌研究生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解昆明

3、医科大学有关保留,、使用学位论文的规定同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被査阅和借阅。学校可公布论文的全部或部分内容(确属保密内容已注明,并在解密后遵守此规定);学校可采用影印、缩印或其他手段保存本学位论文。"i^学位论文作者(签名)::^i絶勺指导獅權名、f晏/斬如Wm曰曰""本人及导师同意将学位论文提交至清华大学中国学术期刊(光盘版)电子杂志社进行电子和网络出版,并编入CNKI系列数据库,传播本学位论文的全部或部分内容,同意按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规

4、定享受相关极益。学位论文作者(签名^指导教师(签名):日月曰川!先WI昆明医科大学硕±研究生学位论文目录摘要1Abstract2附录1缩略语4第一部分:b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗制备工艺的研究4引言11欄311.茜株来源31.2主要试剂31.3主要器材与仪器4125.4主要试剂配方见附录2施52.1菌种名称及来源522.细菌发酵52..21菌株复苏525.2.2菌种鉴定2.2.3fib菌种的发酵培养62.3多糖制备工艺

5、62.3.1沉淀复合糖62.3.2去核酸72.3.3制备粗糖72.3.4苯酪抽提去除蛋白72.3.5超滤72.3.6制备精糖72.4mb多糖的衍化82.4.1衍化过程的Box-behnken实验设计82.4.2H化英膜多糖衍生物的制备82.4.3PRP多糖衍化率与结合率的关系探究102-.4.4H化英膜多糖TT蛋白结合物的纯化102.4.5衍化率与结合率关系的重复性实验验证102-1.5HibTT结合过程的优化121H.5.化多糖衍生物与TT结合实

6、验的正交设计112.5.2多糖衍生物的制备11211.5.3结合物原液的制各251..4结合物的纯化22.2.55最高结合率的重复性实验验证12.6检测132.6.1fib多糖各项指标检测132.6.2H化多糖衍生物与结合物相关检测153结果233.1H化多糖质量鉴定233丄1镜检23I昆明医科大学硕d:研究生学你义.论IHibH-23丄2多糖NMR3谱3丄3Hib多糖相关指标检测24253.2Hib结合相关检测结果253.2.

7、1响应面分析法优化H化多糖的衍化32正.2.交试验优化H化与TT结合的实验结果344讨论41第二部分b型流感嗜血杆菌结合疫苗的冻干及其多糖44ELISA方法臟量检现i44引言44I機46116.主要材料412主要试46.剂71.3主要器材与仪器41.4主要试剂祀方见附录2472方法472ib4.1H冻干剂型的研究72丄1冻干保护剂的配制472丄2Hib结合物原液处理472丄3冻干原液的祀制及分装482丄4冻干482丄5冻干剂型的再研究48

8、2丄6冻干剂型的重复性实验验证484822Hib多糖间接竞争ELISA检.测方法的建立21.2.包被多糖抗原及多糖抗血清浓度的确定4

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