型流感嗜血杆菌结合疫苗

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1、b型流感嗜血杆菌结合疫苗bXingLiuganshixueganjunJieheYimiaoHaemophilusInfluenzaeTypebConjugateVaccine本品系用纯化的b型流感嗜血杆菌(Hib)荚膜多糖（Capsularpolysaccharide，CPS）抗原，通过己二酰肼（ADH）与破伤风类毒素（Tetanustoxoid，TT）蛋白共价结合制成。用于预防b型流感嗜血杆菌引起儿童的感染性疾病，如脑膜炎、肺炎等。1基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。2制造2.1菌种生产用

2、菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。2.1.1菌种名称及来源采用b型流感嗜血杆菌CMCC58547或CMCC58534菌株，来源于中国药品生物制品检定所。2.1.2种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。2.1.3种子批的传代主种子批启开后传代次数不超过5代，工作种子批启开后至接种发酵罐培养传代次数不得超过5代。2.1.4种子批菌种的检定检定菌种可用含羊血的巧克力培养基或Hib综合培养基。2.1.4.1培养特性b型流感嗜血杆菌菌种在普通营养琼脂培养基上不生长，在含羊血的巧克力培养基或在Hib综合

3、琼脂培养基上生长，生长需要X因子（氯化血红素）、V因子（β辅酶A）；卫星试验阳性，菌落形状灰白色、半透明、光滑凸起，湿润，边缘规则。2.1.4.2染色镜检应为革兰氏阴性短小杆菌、有荚膜，有时连成线状，亦可有单个阴性球菌。2.1.4.3生化反应发酵葡萄糖、木糖、半乳糖，产酸不产气。不发酵蔗糖、乳糖和果糖。赖氨酸脱羧酶反应呈阴性。2.1.4.4血清学试验将在35～37℃培养的菌苔，与Hib免疫血清进行玻片凝集试验，应有强凝集反应。2.1.5种子批的保存种子批应冻干后保存于8℃以下。2.2原液2.2.1生产用种子启开工作种子批菌种，接种在液体或

4、固体Hib综合培养基上，制备数量适宜的生产用种子。2.2.2生产用培养基采用Hib综合培养基。不得含有对人体有害或其他过敏原物质。2.2.3培养采用培养罐液体培养，在培养过程中取样进行纯菌试验、涂片革兰氏染色镜检，如发现污染杂菌，应废弃。2.2.4收获及杀菌于对数生长的后期或静止期的前期终止培养，取样进行菌液浓度测定及纯菌检查，然后于培养物中加入适宜浓度的甲醛溶液或脱氧胆酸钠溶液杀菌，以确保杀菌完全及不损伤Hib荚膜多糖为宜。2.2.5多糖提取和纯化2.2.5.1将已杀菌的培养物，离心去菌体后收集上清液，采用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB

5、）沉淀收集复合多糖，乙醇沉淀收集粗制多糖，或超滤浓缩后乙醇沉淀，取上清，然后加入适宜浓度的乙醇溶液沉淀多糖，并依次用无水乙醇、丙酮洗涤沉淀物，干燥后即为粗制多糖，-20℃或以下保存。将粗制多糖溶解于1/10饱和醋酸钠溶液中，然后按适当比例用冷酚溶液重复抽提数次。收集上清液，并透析或超滤脱酚，再加乙醇至最终浓度为60%-80%，离心后收集沉淀物，或超滤浓缩后乙醇沉淀，取上清，然后加入60%-80%的乙醇溶液沉淀多糖，依次用无水乙醇、丙酮于离心洗涤，真空干燥，所得固体即为精制多糖。2.2.5.2多糖检定按3.1项进行。2.2.5.3保存及有效

6、期保存于-20℃或以下，保存时间按批准的执行。2.2.6多糖衍生2.2.6.1将精制多糖溶解后，按适宜比例加入溴化氰进行活化，然后向反应液中加入适宜浓度的己二酰肼溶液，反应过夜。再将反应液超滤或透析。可冻干收集固体衍生物。2.2.6.2多糖衍生物检定按3.2项检定。2.2.6.3保存及有效期保存于－20℃或以下，保存时间不超过30天。2.2.7载体蛋白载体蛋白为破伤风类毒素。破伤风类毒素原液制造和检定应符合“吸附破伤风疫苗”2.1-2.2项规定。可采用柱色谱或其他经批准的方法对破伤风类毒素原液进一步纯化，并配制至适宜浓度。2.2.8多糖蛋

7、白结合物的制备2.2.8.1结合多糖衍生物与破伤风类毒素蛋白等量混合，加入碳二亚胺(EDAC)进行反应。然后透析或超滤透析。2.2.8.2结合物纯化结合物用柱色谱纯化,收集Vo附近的洗脱液，合并各次层析收获的洗脱液即为纯化的结合物，除菌过滤后,即为结合物原液。2.2.9原液检定按3.3项检定。2.2.10保存及有效期保存于2～8℃，保存时间不超过6个月。2.3半成品2.3.1配制用氯化钠注射液稀释多糖结合物原液，每1毫升疫苗溶液含Hib荚膜多糖应不低于20µg。2.3.2半成品检定按3.4项进行。2.4成品2.4.1分批应符合“生物制品分

8、批规程”规定。2.4.2分装应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。2.4.3规格每瓶0.5ml，每1次人用剂量0.5ml，含纯化b型流感嗜血杆菌荚膜多糖10µg。2.4.4包装应符合“生物制品