间接elisa检测林麝源铜绿假单胞菌抗体方法的建立及应用评估

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1、、‘ｔ，’．ｅ、，＼Ｓ８５８９４学号Ｓ２０Ｏ巧４５分类号．＞、、四川巧业大学＇＇、－寺专业碱±学位论文、、＞严间接ＥＬＩＳＡ检测林膀源铜绿假单胞菌抗体方法的建立及应用评估、■‘，．Ｖ参．．‘＊Ｓｈｉｙ／’ｙ任佳会＇占？－￣－々＇＇指导教师熊焰教授一．．．Ｖ．／：占＇－，－＇：＇．／校外导师杨定勇副教授－古－、－苗学位类别兽医硕丈Ｖ？？？－？．’一、．＇‘＾’―一领域名称预防兽医学Ｘ■？＂

2、．，．＜■．、－＇．＇－占、＇．．？‘Ｖ寺、研巧方向动物衞生物与免疮学、三＊＇Ａ、＊—．、＇．二．、？．一：■‘＊，．、、■■？－Ｘ片？＊？，Ａ，＿．－－？．？＊、？＇心．‘’．．．攀－一一．．＇＇皆Ｖ’—？＊：２０１５６；月、＾年．：■＇，‘、■—爲＇＇，；—＇采為‘，藻、＇？＾＇．、．一＇．＇＇＾：＇ｈ、、‘＇占．，－二片心、ＶＵ＇，＇，＊．＾、＇、＊．／，ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉ

3、ｖｅｒｓｉｔｙＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉｔｔｅｄｉｎａｒｔｉａｌｆｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆｔｈｅｒｅｕｉｒｅｍｅｎｔｆｏｒｐｑＭａｓｔｅｒｄｅｇｒｅｅＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄａｌｉｃａｔｉｏｎｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｉｎｄｉｒｅｃｔＥＬＩＳＡｆｏｒｐｐｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａａｉｎｓｔｊＰｓｃｍ成ｗｉｗｉａｓｆｒｏｍＡｆｏｓｃＡｗｇｂｅｒｅｚｏｖｓｋｉｉＢｙＪｉａｈｕｉＲｅｎＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙＰｒｏｆ．ＹａｎＸｉｏｎｇＣｈｅｎｄｕ６１１１３０Ｓｉｃｈｕａｎ

4、Ｃｈｉｎａｇ，，，Ｊｕｎｅ．２０１５论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研巧成果，也不包含为获得四川农业大学或其它的材料一教育机构的学位或证书所使用过。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研巧生签名：年６月１＾日关于论文使用授权的声明：本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有化保留弗向国家，可Ｗ采用影印、缩印或有关部口或机

5、构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅扫描等复制手段保存。、、汇编学位论文同意四川农业大学可用不同方式在不同媒体上发表传播学位论文的全部或部分内容。□本论文不保密。□本论文保密，在＿年解密后适用本授权。＂＂（请在１＾＞上□内划ｖ）研巧生签名：令棘令年＾月化曰导师签名＾。／年＜月类追＾作．摘要铜绿假单胞茵能引起林廳的化肢病，该病病程缓慢、不易发现，发现后也难ｗ一治愈。、重复性好、，给人工养殖林靡造成巨大损失本试验旨在建立种特异性强灵敏度高的间接ＥＬＩＳＡ方法，为监测林廬体内的铜绿假单胞菌抗体水平，并为防控铜绿假单胞菌引起的林

6、廳化賊性疾病提供帮助和指导。－Ｓ－。ＰＡＧＥ提取铜绿假单施菌ｐ１株的外膜蛋白作为包被抗原经ＳＤＳ分析，提￣ｋＤａ？取的外膜蛋白有７１０条带，分子量在１５ｌＯＯｋＤａ之间，是该菌的主要外膜蛋白。通过ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ检测，发现该外膜蛋白有４条印迹条带，分子量分别是４６ｋＤａ、３４ｋＤａ、２５ｋＤａ和巧防ａ，可用作包被抗原。１５／ｍｌ本试验建立的间接ＥＬＩＳＡ方法的最佳条件；外膜蛋白包被浓度为．帖；包‘°Ｃ作用被条件是３７Ｃ，温箱赔育４ｈ；封闭条件为５％脱脂奶粉３７２ｈ；抗体稀释倍’Ｃ赔－１０００倍巧１．５ｈ；ＨＲＰＳＰＡ稀６４０００

7、数为，抗体与抗原作用条件为育释倍数为。Ｃ解育’１．５ｈＴＭＢ作用条件为３７Ｃ显色１５ｍｉｎ。倍；，与抗体作用条件为巧用建立的间接ＥＬＩＳＡ方法检测了大肠杆菌抗血清、沙口氏菌抗血清、不动杆菌抗血清和金黄色葡萄球菌抗血清，结果这四种菌的抗血清均判光铜绿假单胞菌抗体－Ｓ１株阳性血清用外膜蛋白处理后进行检测，结果表明，与未处理组相阴性；把ｐ６３？比．６９％７５．３８％之间。经板间重复试验和板，处理组ＯＤ值忌著降低，阻断率在￣０％之间内重复试验进行重复性检测，