绵羊脂肪型脂肪酸结合蛋白基因（a-fabp）变异研究

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1、分类号__________密级UDC__________单位代码10733甘肃农业大学硕士学位论文绵羊脂肪型脂肪酸结合蛋白基因（A-FABP）变异研究VariationsonAdipocyteFatty-AcidBindingProtein(A-FABP)GeneinSheepofChina徐蕾指导教师罗玉柱教授﹙甘肃农业大学兰州730070）学科专业名称动物遗传育种与繁殖研究方向动物育种理论与技术论文答辩日期2015年5月28日学位授予日期2015年6月答辩委员会主席俞诗源教授评阅人王建林教授刘霞副教授2015年6月T

2、hesisforMasterofAgricultureVariationsonAdipocyteFatty-AcidBindingProtein(A-FABP)GeneinSheepofChinaMScCandidate：LeiXuAdvisor：Prof．YuzhuLuoMajor:AnimalGeneticBreedingandReproductionCollegeofAnimalScience&TechnologyGansuAgriculturalUniversityLanzhou，730070June，2015课

3、题资助本论文由甘肃农业大学盛彤笙科技创新基金（编号：GSAU-STS-1421）、甘肃省创新研究群体计划（编号：1210RJIA005）、国家科技支撑计划（编号：2012BAD3B05）、国家国际科技合作专项（编号：2011DFG33310）资助完成。摘要脂肪型脂肪酸结合蛋白（adipocytefatty-acidbindingprotein，A-FABP）属于脂肪酸结合蛋白（fatty-acidbindingproteinfamily，FABPs）家族，主要功能为结合和转运长链脂肪酸参与脂肪酸代谢过程。本研究基于Ens

4、emble数据库中绵羊A-FABP基因全序列，对7个绵羊品种共20个样本的A-FABP基因全序列测序分析，以明确绵羊A-FABP基因的变异和单倍型特征。结果表明：PCR扩增获得绵羊A-FABP基因全长6474bp，A、T、G、C4种碱基的平均百分比分别为31.48%、33.02%、17.21%和18.29%，A+T平均含量为64.50%，G+C平均含量为35.50%。共发现48处单碱基变异位点和2处微卫星位点M1（(TG)n）和M2（(TA)n），单一变异位点、2核苷酸变异位点和3核苷酸变异位点比例分别为28.85%、4

5、0.4%和0.02%。共发现转换、颠换、插入和缺失4种变异类型，其占变异位点总数的比例分别为45.83%、31.25%、2.08%及20.83%。共发现19种单倍型，单倍型多样度为0.995。A-FABP基因19个单倍型序列的NJ树分化为2个聚类簇，表明A-FABP基因单倍型最初由2个主要单倍型衍化形成。运用PCR-SSCP方法检测了4个绵羊品种的A-FABP基因外显子2-内含子2和外显子3-内含子3区域的遗传多态性并对其变异特性进行了系统分析。结果显示，4个绵羊品种的外显子2-内含子2区域共检测出4个等位基因（A、B、

6、C、D），表现为6种基因型（AA、AC、AD、BB、BC、CC），A等位基因为优势等位基因，在4个群体中的频率均分别是0.4865、0.5333、0.7500和0.4592；不同群体的优势等位基因型不同，滩羊群体、藏绵羊群体、青海细毛羊群体中的优势等位基因型分别为BC、AA、AC。外现子3-内含子3区域在4个群体中共发现A、B、C、D4个等位基因，表现为AA、BB、AB、AC和CD4种基因型，等位基因A为优势等位基因。基因型和等位基因在群体间分布不均衡。只有外显子3-内含子3区域等位基因D在61bp处发生的A→G的突变造

7、成了氨基酸突变。其它突变均发生在内含子区域，所以未发生氨基酸的突变。外显子2-内含子2和外现子3-内含子3区域共有8个突变位点，其中1个位点为碱基缺失，占突变位点的12.5%；6个位点发生转换，占突变位点的75%；1个位点发生颠换，占突变位点的12.5%。在外显子2-内含子2区域，除藏绵羊为中度多态（0.25﹤PIC﹤0.5）外，甘肃高山细毛羊、滩羊、青海细毛羊（PIC﹥0.5）均属于高度多态。在外显子3-内含子3区域除甘肃高山细毛羊为高度多态外（PIC﹥0.5），其它三个绵羊群体均属于中度多态（0.25﹤PIC﹤0.5

8、）。χ2检验结果显示，4个绵羊群体在外显子2-内含子2和外显子3-内含子3区域杂交类群中均偏离了Hardy-Weinberg平衡状态(P﹤0.05)。综上所述，绵羊A-FABP基因是高度多态的，遗传多样性十分丰富，对其多态性的研究可以促进绵羊A-FABP基因的进化研究，同时，为绵羊生长和脂肪性状候选基因的研究积累素材