磷脂酶a1催化大豆磷脂水解及其酯交换研究

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1、暨南大学硕士学位论文题名（中英对照）：磷脂酶A1催化大豆磷脂水解及其酯交换研究HydrolysisandinteresterificationofsoylecithincatalyzedbyphospholipaseA1作者姓名：杜章斌指导教师姓名及学位、职称：汪勇博士研究员学科、专业名称：工学食品科学论文提交日期：论文答辩日期：答辩委员会主席：论文评阅人：学位授予单位和日期：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文

2、中不包含其他人已经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:签字日期年^月:^日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。

3、(保密的学位论文在解密后适用本授权书）签字日期:年^月泣日签字日期年w月#日学位论文作者毕业后去向：*工作单位：电话:I站丨对M通讯地址:通讯地址：j1邮编摘要首先研究了利用核磁共振氢谱（ProtonNuclearMagneticResonance,1H-NMR）、高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HighPerformanceLiquidChromatography-EvaporativeLightScatteringDetector,HPLC-ELSD）对磷脂酰胆碱（Phosphatidylcho

4、line）、溶血磷脂酰胆碱(Lyso-phospholipid)、甘油磷脂酰胆碱(L-α-Glycerophosphorylcholine)进行定量分析检测，建立起有效的定性及定量手段。然后以磷脂酰胆碱纯度35%的富集磷脂为原料，磷脂酶A1(PhospholipaseA1)为工具酶，分别在水相体系中制备LPC，在油水乳化体系中制备GPC，在油水乳化体系中制备富含亚麻酸的结构磷脂。具体研究如下：（1）利用核磁共振氢谱测定磷脂酶A1水解大豆磷脂酰胆碱后的样品中磷脂酰胆碱（PC）、溶血磷脂酰胆碱（LPC）

5、、甘油磷脂酰胆碱（GPC）的相对含量。具体操作为用氘代甲醇溶解样品，进行核磁共振氢谱测定。对比标准品的核磁共振氢图谱，分别选取化学位移δ=4.14~4.16、3.76~3.83、4.40~4.50三处的信号峰作为PC、LPC和GPC的特征性质子峰，并根据PC、LPC和GPC质子峰相对面积与他们的相对分子质量计算三者的相对含量。结果表明，PC、LPC、GPC的平均标样添加回收率分别为103.4%、85.6%、104.8%，相对标准偏差（RSD，n=3）分别为2.2%、5.0%、6.2%。仪器精密度测试

6、中，同一个样品中PC、LPC、GPC含量的RSD（n=5）分别为4.2%，3.5%，2.3%。最后利用本方法对磷脂酶A1水解磷脂的两个样品进行检测，结果表明本方法适用于检测样品中PC、LPC、GPC的相对含量。（2）研究利用HPLC-ELSD测定磷脂样品中甘油磷脂酰胆碱（GPC）含量。检测条件为：岛津CBM20A液相系统，AlltechSilica色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），柱温40℃，甲醇为流动相，流速1.0mL/min，蒸发光散射检测器漂移管温度65℃，空气流速1.7L/min。结

7、果显示GPC为最后出峰的强极性组分，其保留时间为4.97分钟，所得GPC标准曲线为Y=2.0483X+7.7744，线性相关2系数R为0.9914。检测限为6.3μg/mL(S/N=3)，定量限为13.0μg/mL(S/N=10)。GPC的平均加标回收率为102.5%，RSD是2.2%（n=3）。表明本方法分I离效果好，检测结果准确、稳定,适用于酶催化水解磷脂样品中甘油磷脂酰胆碱的定量测定。（3）研究在油包水乳化体系中利用磷脂酶A1水解磷脂制备LPC。首先利用甲醇作为萃取溶剂制备磷脂酰胆碱（PC）含

8、量为37%左右的富集磷脂，然后在水相体系中利用磷脂酶A1水解富集磷脂，制备溶血磷脂酰胆碱（LPC）。分别讨论了料液比、酶添加量、反应时间对LPC得率的影响。结果表明最佳料液比（富集磷脂：水）、酶添加量、反应时间分别为：1：4、66.7U/mL、2h，最佳条件下样品酸值为62.2mg/g。（4）研究了主要在油包水乳化体系中利用磷脂酶A1水解磷脂制备GPC。因为磷脂酶A1是界面酶，所以利用油包水乳化体系显著增大反应体系的界面面积可以提高酶的作用效率，使得高效制备GPC成为