环形泰勒虫裂殖体感染淋巴细胞中牛半乳糖凝集素1互作蛋白的筛选

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1、ｔ：公开分类号：ＳＢ密级馨琢Ｊｔ爲：ＭＡ讓硕立学位论文，，．题目．：环形泰勒虫裂殖体感染淋己细胞中牛半乳糖凝集素１巧作雷白的筛选巧名：李亚琼Ｙ１２２１４０４７１学号：生命科学与■学院；工程学院＿：专业＾基础兽堅挙研究方向：动物寄牛虫及巧分子生物学蔡葵蒙教授导师；李有全副研究员二〇—五年丑月－ＳｃｒｅｅｎｉｎｏｆＧａｌｅｃｔｉｎ１ｈｉｔ：ｅｒａｃｔｅｄｒｏｔｅｉｎｓｇｐｆｒｏｍｔｈｅｌｉｂｒａｒｏｆｌｍｈｏｃｔｅ

2、ｓｉｎｆｅｃｔｅｄｙｙｐｙｗｉｔｈ論ｓｃｈｉｚｏｎｔｓＡＴｈｅｓｉｓＳｕｂｍｉｔｔｅｄ化ｒ化ｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＬｉＹａｑｉｏｎｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＣａｉＫｕｉｚｈｅｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅＰｒｏｆ．ＬｉＹｏｕｕａｎｑＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｆｏｒＮａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓｙＬａｎｚｈｏｕＣｈｉｎａ，西北民族大学生命科学与工程学院２０１２级基础兽医学硕±研究生毕化论文关于学位论文

3、使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的作品，知识产权归属西北民族大学。本人完全了解西北民族大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权西北民族大学可本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时一著名单位仍然为西北民族大，第学。保密论文在解密后应遵守此规定。＂＾化’王、论文作者签名

4、：束导师答叫Ｉ西北民族大学生命科学与工程学院２０１２级基础善医学硕±研究生毕业论义原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。除文中己经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对レ本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体，均已在文中ッ明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。？冰火碱日期？乂叫论文作者签名：：ＩＩ西北

5、民族大学生命科学与工程学院２０１２级基础兽医学硕±研究生毕业论文摘要’环形泰勒虫（ｒａｎａｗｔｏａ）是泰勒科（Ｔｈｅｉｌｅｒｉｉｄａｅ）、泰勒属（巧６舱ｎｆｌ）的一种寄生于牛巨嗤细胞、淋己细胞和红细胞内的血液寄生虫。环形泰勒虫具有转一－。１（Ｇａｌｅｃｔｉｎ１）化宿主细胞的能力，并抑制其调亡牛的半乳糖凝集素是个分一５Ｄ的－子量为１４，．ｋ蛋白质含有个对Ｐ半乳糖巧及其相似结构分子具有亲和为ｔ－ｉ１，的识别域。Ｇａｌｅｃｎ广泛存在于在各种类型的细胞、沮织和器官中在细胞黏Ｇａ－附，生长调

6、节及免疫反应等方面发挥重要的作用，ｌｅｃｔｉｎ１可能在。研究表明寄生虫入侵宿主细胞及在宿主细胞内进行繁殖等方面具有重要的功能。因此，本－ｌ研究（＾Ｇａｌｅｃｔｉｎ在环形泰勒虫裂殖体感染淋己细胞中的功能为研巧切入点，利－用酵巧双杂交技术筛选与其相互作用的蛋白ｌｉ１，Ｗ了解Ｇａｅｃｔｎ在环形泰勒虫入侵及转化宿主细胞过程中的作用。－应用实时焚光定量ＰＣＲ技术，Ｗｐａｃｔｉｎ为内参基因，检测正常淋己细胞和一－环形泰勒虫裂殖体感染淋己细胞中Ｇａｌｅｃｔｉｎ１的表达情况；进步，利用激光共Ｇａ－ｌｅｃｔ

7、ｉｎ１聚焦显微镜技术，对在上述两种细胞中进行亚细胞定位分析。结果表－明，正常的淋己细胞中Ｇａｌｅｃｔｉｎ１基因的表达量为环形泰勒虫裂殖体感染淋己细－８ｌｉ．３３倍ａｅｃｔｎ１的，但胞的；在上述两种细胞的细胞膜和细胞浆中均有Ｇ分布在－环形泰勒虫感染淋己细胞中，ＧａｌｅｃｔｉｎＩ在细胞浆中的分布更靠近细胞内膜附近，而不是散在分布于细胞浆中。从环形泰勒虫裂殖体感染牛淋己细胞单克隆细胞系中提取总ＲＮＡ，应用ＲＴ－ＰＣＲＧａ－技术扩增ｌｅｃｔｉｎ１基因，通过双酶切等技术，将目的基因连接至表达载体ｐＥ

8、Ｔ３０ａ（＋），在原核表达系统中表达目的基因，并纯化重组蛋白；利用纯化的重组蛋白免疫动物制备多克隆抗体，并检测多克隆抗体对天然蛋白的识别性。Ｇａ－ｌｅｃｔｉｎ１蛋白免疫印迹分析结果表明，成功表达了重组蛋白，利用其制备的多克隆抗体具有良好的反应原性ａｅｃｔｎ－１。，且能够很好识别细胞中天然的Ｇｌｉ蛋白－－应用双酶切技术，将用ＲＴＰ