猕猴桃根萃取物调控OASL基因抑制肺癌增殖的机理研究

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1、分类号：R5单位代码：10343学号：151001102硕士学位论文论文题目:猕猴桃根萃取物调控OASL基因抑制肺癌增殖的机理研究RegulatoryrolesofOASLinlungcancercellsensitivitytoactinidiachinensisplanchrootextract(acRoots)研究生姓名：吕佳佩学科专业：内科学（呼吸内科）类型：学术型指导教师：王向东二O一八年五月论文题目:猕猴桃根萃取物调控OASL基因抑制肺癌增殖的机理研究答辩委员会主席：白春学复旦大学附属中山医院答辩委员会成员：蔡国平美国耶鲁大学病理科蒋磊温州医科大学附属第一医院论文答辩日期：2018

2、-5-27目录中文摘要………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………3前言……………………………………………………………5材料与方法……………………………………………………7实验结果………………………………………………………19分析与讨论……………………………………………………27结论……………………………………………………………29参考文献………………………………………………………30附录……………………………………………………………33致谢……………………………………………………………34综述及参考文献………………………………………………35

3、独创性声明……………………………………………………52关于学位论文使用授权声明…………………………………52猕猴桃根萃取物调控OASL基因抑制肺癌增殖的机理研究中文摘要背景：肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一，近年来，肺癌死亡率已经在恶性肿瘤中位于第一位。因此，发现肺癌未知的分子机制和开发新的治疗药物至关重要。猕猴桃根萃取物（acRoots）作为一种传统中药，主要化合物是三萜类化合物，在一些消化道肿瘤中表现出显著的抗癌作用。其他化合物也显示出细胞毒活性，包括酚类成分和异构类黄酮，但其对肺癌的作用及分子机制尚不清楚。众所周知，2'-5'寡腺苷酸合酶（2'-5'oligoadenylatesynth

4、ase，OAS）是一种由IFN诱导的关键抗病毒因子之一，其通过与RNA酶L组合降解病毒RNA来调节病毒感染的早期阶段，抑制病毒复制。但其家族成员OASL，却不同于其他的OAS家族的因子。最近的研究发现OASL似乎与机体适应性免疫相关。本研究中OASL对肿瘤的影响是首次被提出，但具体机制还不清楚。目的：本研究旨在探讨acRoots在肺癌发生发展中的作用。采用生物信息学方法发现表达差异显著的基因,后续的体外实验进行相关性分析及功能和分子机制的研究。方法：我们用CCK8和流式细胞仪检测acRoots对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。基因芯片筛选出差异基因，并在DAVID数据库中用生物信息学方法进行基因富集

5、分析，和KEGG相关通路分析，发现OASL或许是acRoots抑癌作用的关键基因。为了进一步验证，我们用实时定量PCR和免疫荧光分别检测肺癌细胞中acRoots处理后OASL基因和蛋白的变化。此外，干扰OASL基因后，利用Cell-IQ细胞活性监测站动态检测细胞的增殖、迁移、分裂和死亡。Western-blot检测PI3K-AKT蛋白的含量，并用PI3K抑制剂孵育肺癌细胞后加入acRoots,实时定量PCR检测OASL的变化。结果：我们首先提供了临床前证据，证明acRoots可以通过PI3K-OASL信号途径显著抑制肺癌细胞增殖和凋亡。在用不同剂量的acRoots处理后，基因芯片发现肺癌细胞中

6、的免疫相关基因谱的呈异质性改变。其中OASL基因在两种肺癌细胞中经药物处理后表达均升高。因此OASL基因被认为是调节acRoots-肺癌细胞的分子网络中的关键因子，该结果在本实验中得到验证。其中OASL基因表达和蛋白分泌随着acRoots浓度升高而增强。利用OASL小干扰试剂，使OASL1温州医科大学硕士学位论文基因被抑制，acRoots的抗肿瘤作用明显失效。加入PI3K抑制剂抑制PI3K通路，acRoots不再促进OASL表达。可见OASL基因在肺癌细胞对acRoots敏感性调节中发挥重要作用，且是被PI3K信号通路调控的。结论：我们的实验表明，acRoots可以通过PI3K-AKT-OAS

7、L信号途径显著抑制肺癌细胞增殖并促进其凋亡。OASL可能是维持肺癌细胞对acRoots易感性的决定性调节因子之一，并且可能与耐药性的发展有关。OASL的调节可能是在癌症治疗期间改善药物功效的替代策略。关键词：肺癌，猕猴桃根萃取物，OASL,PI3K-AKT2温州医科大学硕士学位论文RegulatoryrolesofOASLinlungcancercellsensitivitytoactinidia