双荧光报告系统的改进及其在CRISPR_Cas技术中的应用

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1、分类号：Q3单位代码：10343学号：151003516硕士学位论文论文题目:双荧光报告系统的改进及其在CRISPR/Cas技术中的应用研究生姓名：谢海华学科专业：生物学类型：学术型指导教师：谷峰研究员二O一八年五月论文题目:双荧光报告系统的改进及其在CRISPR/Cas技术中的应用答辩委员会主席：杨辉中国科学院神经生物学研究所答辩委员会成员：刘勇温州医科大学陈绮温州医科大学论文答辩日期：2018年5月27日温州医科大学硕士学位论文目录目录.....................................................1英文略缩词表....

2、.........................................4中文摘要.................................................5Abstract.................................................71.引言..................................................91.1CRISPR基因编辑技术...............................91.2PAM研究......................

3、....................91.3基因编辑酶活性比较................................91.4基因编辑酶活性测定...............................102.材料与方法...........................................102.1质粒............................................102.2所用细胞系.......................................112.3试剂耗材................

4、.........................112.4仪器设备.........................................112.5主要试剂配方.....................................113.实验方法.............................................123.1CRISPR/Cas9介导的双荧光报告系统改进.............123.1.1pmT/mG双酶切..................................123.1.2PCR产物胶回收....

5、..........................133.1.3高保真酶PCR................................131温州医科大学硕士学位论文3.1.4mTomato-eloxP与pJet载体连接...............143.1.5感受态细胞的制备...........................143.1.6连接产物热激转化............................153.1.7菌落PCR检测阳性克隆.......................153.1.8pmT/mG-eloxP表达质粒构建......

6、.............163.1.9MN小抽试剂盒提取质粒.......................163.1.10靶向eloxP位点SpCas9载体构建.............173.2Cre酶和CRISPR/Cas9活性比较.....................183.2.1细胞复苏....................................183.2.2细胞传代....................................183.2.3最佳转染条件确认............................183.2.4pm

7、T/mG系统比较Cre和Cas9活性..............193.3SpCas9剪切产物鉴定..............................193.3.1基因组（质粒）提取.........................193.3.2SpCas9剪切产物PCR扩增.....................193.4构建mT/mG稳定表达细胞系.........................203.4.1构建靶向AAVS1位点的SpCas9表达质粒.........203.4.2模板导入AAVS1位点.....................