根皮苷对软脂酸诱导的内皮细胞的保护作用及机制研究

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1、温州医科大学硕士学位论文分类号：R5单位代码：10343学号：151002407硕士学位论文论文题目:根皮苷对软脂酸诱导的内皮细胞的保护作用及机制研究研究生姓名：李春盈学科专业：内科学（内分泌与代谢病学）类型：学术型指导教师：郑超教授二O一八年五月1温州医科大学硕士学位论文论文题目：根皮苷对软脂酸诱导的内皮细胞的保护作用及机制研究答辩委员会主席：周嘉强教授浙江大学医学院附属邵逸夫医院答辩委员会成员：沈飞霞副教授温州医科大学附属第一医院谷雪梅副教授温州医科大学附属第一医院论文答辩日期：2018年5月25日2温州医科大学硕士

2、学位论文目录缩略词表…………………………………………………………………………4中文摘要…………………………………………………………………………5英文摘要…………………………………………………………………………6前言………………………………………………………………………………7材料和方法………………………………………………………………………9结果………………………………………………………………………………19分析与讨论………………………………………………………………………32结论…………………………………………………………

3、……………………35参考文献…………………………………………………………………………35附录………………………………………………………………………………39致谢………………………………………………………………………………39综述………………………………………………………………………………40综述参考文献……………………………………………………………………20独创性声明………………………………………………………………………523温州医科大学硕士学位论文中英文缩略词表英文缩写英文全称中文译名AKTProteinkinaseB

4、蛋白激酶BAcr-BisAcrylamide-bisacrylamide丙烯酰胺-亚甲基双丙烯酰胺BSABovineSerumAlbumin牛血清白蛋白DMEMDulbeccomodifiedeaglemedium杜尔伯科改良伊格尔培养基DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜eNOSEndothelialnitricoxidesynthase内皮型一氧化氮合酶FBSFetalBovineSerum胎牛血清HUVECsHumanUmbilicalVeinEndothelialCells人脐静脉血管内皮细胞IC

5、AMIntercellularadhesionmolecule细胞间粘附分子IRInsulinresistance胰岛素抵抗mRNAMessengerRNA信使核糖核酸NONitricOxide一氧化氮PAPalmiticAcid软脂酸PBSPhosphateBufferSolution磷酸盐缓冲液PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟PI3KPhosphatidylinositol3-kinase磷脂酰肌醇3激酶RT-PCRReversetranscriptionPCR逆转录聚合

6、酶链式反应SDSSodiumDodecylSulfate十二烷基磺酸钠SGLT-1Sodiumglucoseco-transporter-1钠葡萄糖共转运体-1SGLT-2Sodiumglucoseco-transporter-2钠葡萄糖共转运体-2siRNASmallinterferingRNA小分子核糖核酸WBWesternblotting蛋白印迹VCAMVascularcelladhesionmolecule血管细胞粘附分子按首字母排序4温州医科大学硕士学位论文根皮苷对软脂酸诱导的内皮细胞的保护作用及机制研究中文摘

7、要背景及目的:本研究拟建立软脂酸（PA）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）胰岛素抵抗的，明确钠葡萄糖转运体-1（SGLT1）和钠葡萄糖转运体-2（SGLT2）在人脐静脉内皮细胞上的表达；检测非选择性SGLT2抑制剂根皮苷（phlorizin）对PI3K/AKT/eNOS信号通路的激活，缓解PA引发的内皮细胞一氧化氮（NO）生成能力受损的作用，揭示根皮苷对内皮细胞的保护作用、改善胰岛素抵抗的分子机制。方法:含不同浓度的PA(0.1mM、0.2mM、0.3mM)PA的培养基孵育HUVECs18h，根据葡萄糖氧化还原酶试剂

8、盒测量葡萄糖消耗量，取最适PA浓度0.3mM建立内皮细胞胰岛素抵抗模型；根皮苷（50nM）干预半小时后，通过免疫印迹法（WesternBlot）测定SGLT1和SGLT2蛋白表达和PI3K/AKT/eNOS通路蛋白的磷酸化水平；荧光定量PCR法检测SGLT1、SGLT2mRNA的基因层面表达；使用硝酸还原酶法检测细胞