star对软脂酸导致的内皮细胞功能障碍的保护作用研究

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1、万方数据袒堡大学硕士生毕业论文论文题目StAR对软脂酸导致的内皮细胞功能障碍的保护作用研究Theprotectiveroleofsteroidogenicacuteregulatoryprotein(STAR)inendothelialdysfunctioninducedbyPalmiticAcid．研究生姓名：学科、专业：导师：导师小组成员：田玳病理学与病理生理学殷莲华教授宁艳霞讲师李晓波讲师本研究受国家自然科学基金(NSFC30900716和NSFC81170253)的资助2012年5月铿黜必万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．4英文缩写及中文对照⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一7第一部分类固醇激素合成急性调节蛋白对内皮细胞脂质代谢相关基因的影响第二部分类固醇激素合成急性调节蛋白对软脂酸引起的内皮细胞功能障碍的保护作用全文小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·52附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘53致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·54综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘55万方数据StAR对软脂酸导致的内皮细胞功能障碍的保护作用研究中文摘要类固醇激素合成急性调节蛋白(steroidogenicacuteregulatoryprotein，StAR)是胆固醇的一种转运蛋白，主要参与胆固醇代谢，合成类固醇激素。本课题组前期研究表明StAR表达于肝脏、血管内皮细胞及巨噬细胞中，具有在线粒体内外膜间转运胆固醇、调节胆固醇代谢的作用。血管内皮除了维持血管壁完整外，还具有重要的稳态调节功能：首先，内皮细胞通过其生成并释放的一氧化氮(NO)、缓激肽、内皮素、前列环素调节血管张力；其次，内皮细胞通过相关血

4、管活性物质抑制炎性细胞、血小板的聚集和粘附，抑制平滑肌的增殖和迁移等。某些内源性和外源性因子导致血管内皮功能异常，包括精神性和生理学应激、动脉粥样硬化、高血压、老龄化、炎症和糖尿病等疾病状态，使内皮从稳定状态变为失平衡状态，即内皮功能发生异常，又称内皮功能障碍。内皮功能障碍是动脉粥样硬化等心血管疾病的始发环节，是由长期暴露于心血管疾病危险因素引起的，其中最主要的危险因素是以高血脂为特征的脂质代谢紊乱，又以循环血中的高游离脂肪酸(freefattyacid，FFA)对内皮细胞的损害最为重要，也是目前该领域研究的热点之一。研究表明，FFA水平增高可损害内皮细

5、胞一氧化氮合酶(eNOS)的活性，抑制内皮细胞依赖性的血管舒张、促进内皮细胞炎症因子的释放及诱导细胞的凋亡等。因此，针对FFA导致的内皮功能障碍的相关机制的研究，对于保护内皮细胞功能，进一步预防和治疗动脉粥样硬化具有重要意义。综上，本课题拟在原代大鼠主动脉内皮细胞中过表达StAR后，研究StAR是否对软脂酸(palmiticacid，PA)引起的内皮功能障碍具有保护作用。本研究共包括两部分内容，详细如下：第一部分：类固醇激素合成急性调节蛋白(STAR)对原代大鼠主动脉内皮细胞脂质代谢基因表达的影响我们以大鼠主动脉内皮细胞(Rataortalendothe

6、lialcell，RAEC)为研究对象，首先用动脉环法成功培养了大鼠主动脉内皮细胞，利用倒置显微镜观察培养细胞的形态学特征；利用细胞免疫化学方法显示血管内皮细胞特异性表面抗原标志；其次利用携带StAR全长cDNA的腺病毒载体转染培养的内皮细胞，利用实时定量PCR和Wesernblot方法验证StAR在内皮细胞中过表达，同时检测转染后细万方数据胞内脂质代谢相关基因的表达变化。结果显示：动脉环法培养的大鼠主动脉内皮细胞72小时后自动脉环中爬出，具有典型血管内皮细胞特征(铺路石样、管腔样形成)，CD31、vW因子等内皮细胞特异性标志表达阳性；利用腺病毒Ad．S

7、tAR，以不同的感染复数(multiplicityofinfection，MOI=10，20，50，100)转染RAEC，48小时后提取细胞总RNA及蛋白，StAR的mRNA及蛋白表达随着病毒感染复数增加而递增，结果提示利用腺病毒载体在RAEC中成功过表达StAR。其次，在腺病毒转染48小时后，与转染空载体组相比，过表达StAR组FAS、ACC．1、HMGR、LDLR、SREBP．2mRNA表达明显降低(尸<0．05)；最后，在腺病毒转染48小时后以氯仿／异丙醇／NP．40及氯仿／TritonX．100分别萃取细胞内胆固醇及游离脂肪酸，利用胆固醇检测试剂

8、盒(CHO酶法)和游离脂肪酸超敏测定试剂盒检测细胞内总胆固醇和游离脂肪酸含量，结