基于7s和11s大豆球蛋白的分离及酶解研究

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1、广西大学硕士学位论文7S和11S大豆球蛋白的分离及酶解研究姓名：张雪旺申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：刘汉灵200605017S和1ls大豆球蛋白的分离及酶解研究摘要本文综述了目前大豆蛋白质及其酶法水解产大豆肽的研究现状，讨论了大豆蛋白中的主要成分7s和11s的功能特性、分离方法及其应用前景。为了进一步探讨7s和11s两种功能性不同的大豆球蛋白的分离新工艺和方法，以及更好的解决大豆蛋白难酶解的问题，本文从大豆蛋白质原料的结构入手，选择低温脱脂大豆粕为原料，首先研究了7s和11s大豆球蛋白的分离方法，通过几种传统分离方法的比较实验，提出了一种碱提酸沉结合膜分离技术的

2、分离新工艺，sDs—PAGE电泳分析表明碱提酸沉膜分离技术得到的7s和11s大豆球蛋白的相对纯度分别达到75．5％和84．7％，结果均优于传统方法。其次，采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶等几种常用的蛋白酶对分离的7s和11s球蛋白进行酶解比较实验，发现在相同条件下，7s比11s酶解后的酸溶多肽得率高，7s比11s相对更容易被酶解；通过扫描电镜和sDs—PAGE电泳分析7s和11s的酶解产物，表明7s和11s分子酶解前后的变化明显，但两种大豆蛋白经酶解作用后，均有相当部分未被酶解的蛋白分子残留在酶解残渣中，而酶解离心后的上清液中则已基本不存在原来的蛋白质大分子。最后，结合大豆蛋白质

3、中7s和11s的氨基酸组成及酶的专一性，并通过酶的筛选实验，选择碱性酶+中性酶为最佳水解酶。通过单因素实验，确定了优选酶的最佳工艺条件为：底物浓度[s]=6％、酶用量E／s=6‰、pH=8．O、反应时间t=4hr，反应温度T=50℃。在最佳工艺条件下，可溶多肽得率达到73．79％，其中酸溶多肽得率达到65．53％。对酶解所得大豆多肽分子量分布的分析表明，大豆多肽是各种不同分子量的多肽组成的混合物，且呈连续分布，分子量分布基本在5000Da以下，其中2000Da以下的功能性大豆肽占相当比重，达到95．26％。关键词：大豆蛋白质7S球蛋白11S球蛋白分离酶解IIRESEARCH

4、0NSEPARAT10NANDHYDROLYSIS0F7SAND11SGLOBULININSOYBEANPROTEINABSTRACTBasedonthesunlmarizeddeVelopmentandapplicationofsoybeanproteinaswellassoypeptideproductionbyenzymatichydrolysis，thispaperdiscussedthefIunctionalcharacteristics，separationmethodsandapplicationsof7Sandl1Sglobulin，whicharethem

5、ainingredientsofsoybeanprotein．Atmesametime，someproblemswerefoundduringseparationsof7Sand1Sglobulinandhydrolysisofsoybean．Accordingtothestructureofsoybeanprotein，thispaperstudiedtheseparationmethodsof7Sand1lSglobulin，andanewseparatingmethodwasputfonvard：withlow-temperaturedefattedsoybeandr

6、afrasrawmaterial，atechniqueofalkalineextraction，acidicprecipitationandmembranefilteringwasused．TheseparationpuritiesbynewmethodweredeteHllinedandcomparedwiththoseofsometraditionalmethodsbySDS-PAGEgradientelectrophoresis．Theresultsshowedthatthenewmemodwasbetterthantraditionalonesandthepurit

7、yofseparated7Sand1S910bulinwasupto75．5％and84．7％respectivelySecondly，theenzymatichydrolysesof7Sand11Sglobulin行omseparatedde断edsoybeandrafrbyneu仃al，alkalineproteaseandsomeotherenzymesIIIwerestudiedjnthispaper．Theresultsshowedthat，conVersionrateof7Spolypeptideish