香烟提取物所致小鼠肺气肿模型骨髓内皮祖细胞c-kit可溶性干细胞因子交互作用受损及其机制研究

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1、万方数据中图分类号UDCR563．361O博士学位论文学校代码10533香烟提取物所致小鼠肺气肿模型骨髓内皮祖细胞c．Kit／可溶性干细胞因子交互作用受损及其机制研究C．Kit／solublestemcellfactorinteractionofbonemarrowendothelialprogenitorcellsisinvertlyinfluencedinacigarettesmoke．．inducedemphysemamousemodel作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：何胜东临床医学内科学(呼吸)湘雅二医院陈平教授论文

2、答辩日期丑!兰：!!：至兰答辩委员会主席中南大学2013年9月‰

3、～vj’l万方数据本课题资助基金：国家自然科学基金(81070039)国家自然科学基金(81170036)【IIILIlllLIIIIIqllHLIIIIklllltIIIY2688365万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献

4、均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：4坶i馘日期：逆f；年上月签二-日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：≤红雅季日期：捌年卫月巫日导师签名日期：丛年兰店万方数据香烟提取物所致小鼠肺气肿模型骨髓内

5、皮祖细胞c．K谢可溶性干细胞因子交互作用受损及其机制研究摘要：背景：肺微血管内皮损伤和细胞凋亡是COPD／肺气肿发病的重要机制之一。目前认为损伤内皮的修复主要机制是在各种促内皮修复和血管发生因子作用下局部血管内皮细胞和循环内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)定向迁移和增殖的过程。烟草烟雾暴露引起外周血中EPCs数量减少。因为骨髓EPCs动员能力影响外周血中EPCs数量，我们推测在烟草烟雾暴露的引起的COPD／肺气肿发病过程中可能存在有与骨麓EPCs动员相关的c．Kit何溶性干细胞因子(solublestemc

6、ellfactor,s．SCF)相互作用减弱的现象。目的：本研究利用腹腔注射香烟提取物(CigaretteSmol【ingExtract，CSE)构建小鼠肺气肿模型，观察经腹腔暴露CSE诱导的肺气肿小鼠骨髓中EPCs动员相关的c．K州s．SCF交互作用水平(即骨髓c．Kit(+)EPCs数量和s．SCF浓度)是否存在变化；如果证实骨髓c．Kit(+)EPCs数量和s．SCF存在变化，我们将进一步研究这些变化所涉及的相关机制。方法：1．香烟提取物所致小鼠肺气肿模型中骨髓c．Kit+内皮祖细胞和可溶性干细胞因子变化：24只4---6周龄的雄性C57BL

7、／6J小鼠随机分为正常对照组及CSE(每组12只)，分别在实验第O、11及22天定时定量腹腔注射CSE溶液／PBS溶液，第7天收集骨髓标本(每组6只)，第28天测定小鼠气道阻力和动态肺顺应性后收集肺组织标本和骨髓标本。肺组织病理切片苏木素．伊红(腼)染色后观察形态学改变并定量测定平均肺泡隔厚度(MAST)、平均内衬间隔(MLI)及肺泡破坏指数(DI)。免疫印迹和实时定量PCR测定小鼠肺组织c．Kit蛋白和mRNA表达。骨髓细胞经红细胞裂解后经流式细胞仪测定EPCs和c．Kit(+)EPCs水平，ELISA测定骨髓冲洗液上清液s．SCF浓度。2．香烟

8、提取物所致小鼠肺气肿模型中可溶性干细胞因子减少机制初探：明胶酶谱法测定小鼠骨髓冲洗液上清MlVIP．9活性，化学法测定小鼠骨髓冲洗液上清NO浓度，ELISA法测定小鼠骨髓冲洗液上清MMP．9和TIMP．1浓度。免疫印迹法测定小鼠骨髓细胞SCF、MMP．9、TIMP．1和NOS3蛋白水平。实时定量PCR测定小鼠骨髓组织SCF及MMP．9mRNA表达。3．香烟提取物对体外培养的骨髓内皮祖细胞增殖和凋II万方数据亡及其c．Ki什细胞亚群构成的影响：采用密度梯度离心法分离小鼠骨髓EPCs并培养；通过观察细胞形态学改变、对培养第7天的贴壁细胞行DiI．acL

9、DL摄取及FITC．UEA．I结合双染鉴定及流式细胞术检测细胞表面标志物，综合鉴定EPCs。分别以O．5％、1％及2％CS