青岛地区宫颈上皮内瘤变中hpv16 e6和e7多态性分析

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1、{两妻目的HPVl6基因多态性在不同的地区存在着差异，并可能导致HPV的致病性发生改变。本实验拟分析宫颈上皮内瘤变III级组织中，HPVl6主要的致癌基因E6、E7的突变情况，以探讨山东青岛地区癌前病患中HPVl6E6和E7基因的主要突变特征与突变型别，为防治宫颈癌提供新的研究思路。方法与材料1．收集51例于青岛大学医学院附属医院妇科行宫颈冷刀锥切治疗的石蜡组织标本，病理诊断均为宫颈上皮内瘤变IⅡ级。这些患者均首次于妇科门诊就诊时通过高危型HPV分型检测。2．用蛋白酶K法和OMEGA试剂盒提取Siha细

2、胞与HPVl6阳性石蜡组织中DNA。3．把提取得到的DNA作为模版，进行PCR扩增，获得E6和E7完整基因片段。4．纯化得到的基因产物，并进行碱基测序，与Genbank中HPVl6E6、E7标准序列进行比对分析，寻找HPVl6E6和E7的改变。结果1．宫颈上皮内瘤变III级中HPVl6阳性者共33例，共有32例扩增出E6、E7全基因片段，其中30例(93．75％)存在碱基突变。2．本实验中共检测到3种HPVl6变异亚型，按比例顺序分别为AS型(21／32)、E—P(9132)型和E(2／32)型。3．3

3、2例扩增出E6、E7基因片段的组织中，E6基因共发现7个突变位点，其中6种有义突变，其中发生T178G突变的共有21例。E7基因有11种碱基突变，有7种突变可导致氨基酸改变；其中常见的突变位点及发生例数分别为A647G(22例)，T846C(19例)，T843C(7例)，G666A(6例)；只有A647G可以引起氨基酸置换。4．E6T178G和E7T846C、A647G是常见的联合突变位点。结论山东青岛地区HPVl6E6、E7基因碱基序列跟Genbank中标准株比较存在多种突变。硕士研究生王玉洁(妇产科

4、)指导教师车艳辞副教授关键词：宫颈上皮内瘤变；人乳头瘤病毒16；E6；E7；基因多态性ABSTRACTobjectiveHPVI6genepolymorphismdifferedbetweenregions，anditwouldincreasetheriskofcervicalcarcinoma．WeanalyzedthemutationofoncogenesE6andE7duringcervicalintraepithelialneoplasiaIIIlesions，andtrytOinvestiga

5、tethepolymorphismofHPV16E6／E7genesandtherelationbetweenthemutationsanddifferentstagesofcervicallesionsinQingdao．Methods1．51conizationparaffinsamplesdiagnosedascervicalintraepithelialneoplasiaIII(CrNIII)werecollected，Thesepatients’HPVgenotypingshowedHPVl6

6、positiveatGynecologyclinic，theAffiliatedHospitalofMedicalCollegeQingdaoUniversityfromMay．2010toDes．2011．2．DNAsampleswereextractedfromtheCINIIItissueswith．3．E6andE7genesWascollectedfromamplifiedHPV16positivesamples．4．ThePCRproductswerepurified，sequencedan

7、danalyzed．Results1．DuringCINIIIlesions，HPVl6wadpositivein33women．E6／E7sequenceWastakenfrom32samples．2．As(21／32)andE—prototype(9／32)werethemostwidespreadbranchesofHPVl6inQingdao．ThereWasonly2samplesEpositive．3．Therewere7mutationpointsinE6gene，6ofwhichamin

8、oacidschanged．ThehotspotofvariantWasatnt178fromTtoG(T178G,21／32)．InE7gene，itwasdiscovered11points，and7ofthemwouldproduceanotheraminoacid．A647G(22／32)，T846C(19／32)，T843G(7／32)，G666A(6／32)wasthemostfrequentmutations．4．Jointm