转基因表达乙型肝炎病毒抗原特异性细胞毒性t淋巴细胞受体的研究

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1、分类号R3密级公开$111JJIJJMJIIIIJMJMiJJllIY2441888学校代码10601编号1001023IIIIIHIIIIIII[1硅咎区警W吃F281⋯GUILINMEDICALUNIVERSITY硕士学位论文转基因表达乙型肝炎病毒抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞受体的研究学科专业：病理学与病理生理学研究方向：乙型肝炎的发病机制研究生姓名：吴静学号：Y1001023学位类型：科学学位导师姓名：徐东平教授二。一三年四月独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特另lJDn以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人

2、已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得(洼；如逡查基丝重要挂别虚明鲍!奎拦亘窒2或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：哭擀签字目期：讪f裤妇净日J学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社、中国科学技术

3、信息研究所将本学位论文收录到《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》、《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：黑薛＼J签字日期：Ⅵ1净5月哆日焉：絮k签字日期：讼房年÷月]9日目录转基因表达乙型肝炎病毒抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞受体的研究(论文题)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5英汉缩略词对照表⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．13月IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．1研究对象⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．2主要实验试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯171．3主要实验仪器．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．4皿A。A2分型和亚型的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．5HBV

5、特异性CD8T细胞的获得⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯191．6提取优势CTL细胞RNA及逆转录反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．211．75'RACE获取TCR基因双链及分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231．83’RACE获取TCR“p链恒定区基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．251．9回收和克隆5'RACE和3'RACE产物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。261．10OVERLAPPCR制备全长0【链p链全长基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯281．11TCR分子表达载体构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯291．12重组载体转染包装细胞获取TCR基因重组逆转录病毒⋯⋯⋯⋯⋯．331．1

6、3重组病毒转导TCR表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯372结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯402．1TCRot链p链的获得⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯402．2重组TCR分子的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯442．3TCR“p链基因重组逆转病毒的包装⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．452．4重组TCR在细胞表面的转导表达与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．463讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯484结j沧⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．53综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．59转基因表达乙型肝炎病毒抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞受体的研究中文摘要乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染是一种严重危害人体健康的常见疾病，呈世界流行趋势。据世界卫生组织报道，全球约20亿人曾感染过HBV，其中3．5亿人为慢性皿V感染者，每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝