视网膜新生血管化相关因子基因多态性与rop的关联研究

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1、南方医科大学2010级博士学位论文视网膜新生血管化相关因子基因多态性与ROP的关联研究AssociationbetweentheGenePolymorphismsofRetinalNeovascularizationFactorsandRetinopathyofPremature学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院刘培辉封志纯儿科学科研型博士第二临床医学院2013年03月20日广州㈣㈣㈣删0㈣IY2406533博士学位论文视网膜新生血管化相关因子基因多态性与ROP能J关联研究博士研究生：刘培辉指导教师：封志纯摘要背景早产儿视网

2、膜病变(Retinopathyofprematurity，ROP)是一种发生于小胎龄、低体重的早产婴儿中的血管增殖性视网膜病变，在世界范围内，ROP是导致儿童视力损失和失明的主要病因。随着新生儿监护技术的提高，极低与超低出生体重儿的存活率不断上升，导致ROP的高危人群也不断扩大。所以尽管ROP的诊疗技术取得了很大进展，但该症仍然是早产儿视力损害和致盲的最主要原因。在出生体重低于1250克的早产儿中ROP有50％的发病率，其中，10％发展为3期病变。视网膜脱离一般发生于3期病变以上的重症患者，大部分为退行性病变。ROP的主要病理特征是视网膜新

3、生血管化，血管的异常增生引起视网膜脱离、黄斑皱褶、近视、弱视、斜视，最终可能导致视力损失和失明。ROP的病因未完全明了，多种因素增力IIROP的危险性，尤其是早产、低出生体重和氧气治疗与ROP的发病相关。近年来临床研究发现，ROP在白人中的患病率明显高于黑人，男性的发病率高于女性。更发现在给予严格及时的干预治疗后，有的患)LROP可以自行消退，有的却不断发展。提示遗传背景不同可能造成这些差别，基因差异不仅与ROP发病的风险有关，而且会影ⅡIfiJROP的程度。单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)

4、是最常见的基因变异，包括血管内皮生长因子在内多种血摘要管调节因子与视网膜新生血管化有密切关系，评价视网膜新生血管化相关因子的基因多态性对ROP发病的影响将有助于高风险人群的早期鉴别与及时干预。近年来，来自发达国家的学者已经对多个血管调节因子基因多态性与ROP的关联性展丌了多项研究，为遗传因素对ROP发病的影响提供了警示。然而，这些研究往往局限于单个候选基因的个别位点，缺乏对多基因、多位点的联合研究，使结果缺乏准确性；并且由于研究方法不同和目标人群的种族差异，导致很多结果互相矛盾，缺乏肯定性的结论。而国内该领域的研究更是几乎空白。目的：早产儿

5、视网膜病变(ROP)是常见的儿童致盲性疾病，视网膜新生血管化异常是ROP的主要病理特征。本研究拟在中国汉族人群中，采取候选基因策略、病例对照研究的方法，应用质谱分析等SNP分型技术，联合分析多基因的多个SNP位点对不同程度ROP发病的影响。以验证视网膜新生血管化相关因子基因多态性与ROP的关联性，识别和评价遗传因素对ROP发生发展的作用。结果对ROP的防治与管理有重要指导意义，并为探讨ROP的发病机制、易感基因的筛查及未来的基因治疗奠定理论与实验基础。方法：1采取病例．对照研究，研究对象为2011年1月至2012年12月期间，在深圳市妇幼保

6、健院新生儿科住院的早产儿。由同一眼科医师通过双目间接检眼镜或广角数码视网膜成像系统(RetcamII)进行ROP筛查，ROP的筛查、诊断、分期标准依据2004年中华医学会制定的《早产儿治疗用氧和视网膜病变防治指南》。在完成筛查的早产儿中，选择胎龄<32周或出生体重<15009的早产儿。其中，随机选择90例筛查正常的早产儿为对照组，根据ROP病变严重程度将ROP割乙分别选入重症组和轻症组，重症组73例：轻症组78例，3组共241例。重症组包括阈值前l型ROP、阈值ROP、4、5J蓼JROP及急进性后部型ROP(AP．ROP)，患儿需要接受激光

7、光凝或玻璃体视网膜手术治疗；轻症组包括l、2期ROP、未达到阈值病变标准的3期ROP及以上各期瘢痕期ROP，患儿不需要进行手术治疗。均排除家族性渗出性视网膜病变家族史、其他眼底病变者、Norrie’Sdisease、糖尿病、严重TT博士学位论文心脏病、呼吸性疾病、肝肾功能异常及其他全身血管异常性疾病。所有患儿均为汉族，无血缘关系。本项研究获得受试者家长签名的书面知情同意书和我院伦理委员会的批准。2参考国外文献，选择7种视网膜新生血管化相关因子的基因作为候选基因，检测其中14个SNP位点的多念性。3所有受检者各取外周静脉血0．5ml，置于乙二

8、胺四乙酸(EDTA)抗凝管，保存在．80℃冰箱。采用血液基因组抽提试剂盒提取DNA。根据引物设计原则，采用PrimerPremier5．0软件自行设计引物序列，PCR仪扩增后得到