pcv2逃逸天然免疫分子机制研究

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1、PCV2逃逸天然免疫分子机制研究MolecularMechanismsofPCV2EscapefromInnateImmunity学科专业：生物学论文作者：代松宝指导教师：张蕾副教授天津大学生命科学学院二零一七年五月万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论

2、文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关保留、使用学位论文的规定。特授权天津大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日万方数据摘要猪圆环病毒2型（porcinecircovirus,PCV2）感染影响机体的免疫功能，与猪断奶后多系统衰弱综合症等多种猪病的发生密切相关，

3、给养猪业造成巨大的经济损失。已有研究表明PCV2感染会引起淋巴细胞数量减少、干扰素生成细胞功能受损，引发多系统病变，是猪重要的免疫抑制性病毒。为了揭示PCV2感染与天然免疫之间的关系及机制，本文应用PCV2细胞感染模型，研究了PCV2主要编码蛋白对细胞模式识别受体、胞内免疫应答分子、信号转导分子及干扰素等的影响，从先天性免疫入手来研究PCV2及其主要结构蛋白和非结构蛋白对感染细胞功能的影响，探讨其逃逸天然免疫的可能机制。研究内容如下：1.PCV2体外感染细胞对先天性免疫的抑制效应为了研究PCV2体外感染对天然免疫的影响，我们利用相对

4、荧光定量的方法，对PCV2感染PK-15细胞、PAM细胞后的抗原提呈分子、模式识别受体及核酸感受器、干扰素及其转录因子、细胞因子、DNA信号通路关键接头分子的转录情况进行了评价，结果发现：病毒感染通过TLR3、TLR9介导的MyD88-NF-κB依赖途径上调IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、NF-κB的转录。同时cGAS、MAVS、TBK1、IRF3、IFN-β及IFN-γ的转录水平下调；进一步利用荧光素酶报告系统分析PCV2感染PK-15细胞对IFN-β的影响，结果显示PCV2感染通过抑制IRF3启动子活性抑制Poly(

5、dA:dT)、cGAS诱导的IFN-β转录。以上结果说明PCV2感染引起以IFN-β转录水平下调为主的天然免疫系统抑制，另外可能通过TLRs介导的MyD88-NF-кB途径引起炎症反应。2.PCV2主要编码蛋白对IFN-β信号通路的影响采用IFN-β、NF-кB、AP-1和IRF3启动子的荧光素酶报告系统检测PCV2ORF1、ORF2、ORF3对干扰素的调控作用。结果显示PCV2ORF1能够激活干扰素通路，ORF2可以抑制干扰素通路，而ORF3对干扰素通路的影响不明显；为了进一步研究ORF1、ORF2调控干扰素通路的机制，我们通过对

6、DNA信号通路的关键分子过表达分析，发现ORF1、ORF2在调控干扰素方面表现出相反的特性，ORF1能够通过启动子NF-кB激活IFN-β的产生，而ORF2则通过启动子NF-кB、IRF3抑制IFN-β的产生，且ORF1、ORF2在IRF3上游发挥调控作用。综上所述，PCV2感染引起各类细胞因子紊乱，造成以IFN-β下调为主的天然免疫抑制，其编码的蛋白ORF1、ORF2在IFN-β调节方面表现出相反的特性，I万方数据PCV2可能通过GMP-AMP信号途径，调控IFN-β的表达，ORF1通过NF-кB激活IFN-β，ORF2通过IRF

7、3启动子抑制IFN-β的转录表达。关键词：猪圆环病毒2型，天然免疫，干扰素β，GMP-AMP信号通路II万方数据ABSTRACTTheemergenceofporcinecircovirustype2(PCV2)associateddiseasessuchasparticularlypostweaningmultisystemicwastingsyndrome(PMWS)wasashockfortheswineindustryandformulatedaconsiderablechallengeforresearchersinthe

8、areaofviralimmunologyinswine.ThefeaturesofPCV2infectionofwhichlymphoiddepletionandnaturalinterferon-producingcellsinh