葡萄子原花青素对糖尿病大鼠心肌保护机制的研究

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1、原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：叠兰茎鱼日期：竺!兰!关于学位论文使用授权的声明本人同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的印刷件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签

2、名：叠羔茎鱼导师签名：日期：竺至二山东大学博士学位论文葡萄子原花青素对糖尿病大鼠心肌保护机制的研究专业：内科学(心血管病)博士研究生：程梅博士生导师：高海青教授中文摘要研究背景糖尿病(diabetesmelfitus，DM)是一种多病因引起的内分泌代谢疾病，是由胰岛素分泌及／或作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱，其特点是慢性高血糖。糖尿病的根本危害在于其各种并发症，糖尿病心肌病(diabeticcardiomyopathy，DCM)是其重要的慢性并发症之一，是导致糖尿病晚期死亡的主要原因。研究糖尿病心肌病的发病机制，探讨葡萄子原花青素(grapeseedproanthocyan

3、idinextrac-舡，GSPE)对糖尿病大鼠心肌的保护机制，对延缓糖尿病心肌病的病理进程，改善预后，降低死亡率有重要的临床意义。糖尿病慢性并发症的发病机制包括：糖基化终末产物(AGEs)途径、多元醇途径、蛋白激酶C(PKC)激活途径、己糖胺途径和氧化应激等。高糖情况下，以上机制共同作用，引起一系列病理变化．其中AGEs途径仍为研究重点。随着分子生物学研究水平的提高，非酶糖化研究不断深入，AGEs、糖基化终末产物的受体(receptorforadvancedglycatonendproducts，RAGE)、核因子xB(neuclearfactorkappaB，NF-KB)及多种

4、细胞因子、炎症因子的发现，其相互之间的复杂联系在诱发和促进糖尿病并发症，尤其是糖尿病心肌病的发生、发展中的作用，越来越受到人们的重视。AGEs发挥作用的一个重要途径便是通过与内皮细胞等细胞膜上的特异受体RAGE结合，引起细胞因子、激素、氧自由基等可溶性物质含量的改变，导致多种蛋白基因表达水平的改变，参与细胞凋亡过程，引发一系列代谢紊乱，这可能是导致糖尿病并发症的关键途径。抗RAGE抗体或sRAGE阻断山东大学博士学位论文AGEs与RAGE相互作用能逆转糖尿病心血管并发症的进展。GSPE是从葡萄子中提取的多酚类化合物，具有很强的抗氧化活性，还具有抗动脉硬化和调节血脂等作用，对糖尿病大

5、鼠心肌损害方面的干预研究，国内外尚未见报道。本实验通过建立糖尿病大鼠模型，运用GSPE进行干预，采用透射电镜、HE、PAS、MASSON染色、免疫组织化学及RT-PCR等方法，同时测定血浆中AGEs等指标，从蛋白质和基因水平上探讨糖尿病心肌病的发病机制和观察GSPE对糖尿病大鼠心肌病的干预效果，并探讨其作用机制。目的：本研究通过链脲佐菌素(streptozocin，STZ)诱导糖尿病大鼠动物模型，应用GSPE进行治疗干预，在此基础上，观察24周，旨在探讨糖尿病心肌病的发病机制，研究GSPE对糖尿病心肌病的干预作用。方法：雄性Wistar大鼠尾静脉注射O．1％STZ以建立糖尿病模型，

6、成模后随机分为2组，糖尿病对照组(DMl组，n--8)和糖尿病GSPE治疗组(GSPE250mg／kg／d，DM2组，n=12)，另设2组，正常对照组(C1组，n=10)和正常GSPE治疗组(GSPE250mg／kg／d，C2组，n=lO)。观察24周后，处死大鼠，采血测空腹血糖(fastingplasma#ucose，FPG)、糖化血红蛋白(glycosylatedhemoglobin，HbAIC)、AGEs等指标；对各组进行HE、PAS、MASSON染色，观察糖尿病大鼠心脏组织的病理改变；应用透射电镜观察心肌超微结构改变；应用免疫组织化学方法观察RAGE、核因子-rB(ncuc

7、lcarfactorkappaB，NF-r,B)、转化生长因子pl(transforminggrowthfactorBt，TGF一13t)、结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor，CTGF)在心脏组织中的表达情况；半定量PT-PCR方法检测大鼠心脏组织RAGE、NF．r．B、TGFopl和CTGF基因表达情况。结果：1．一般观察：实验过程中，DMl组大鼠呈现明显多尿、多饮、多食及消瘦，皮毛污秽无光泽，生长缓慢；DM2组糖尿病大鼠上述