水通道蛋白3与人皮肤成纤维细胞光老化的机制研究

《水通道蛋白3与人皮肤成纤维细胞光老化的机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据中图分类号UDCR75610博士学位论文学校代码!Q§圣三密级公珏水通道蛋白3与人皮肤成纤维细胞光老化的机制研究MechanisticStudyofAquaporin3inPhotoagingofNormalHumanSkinFibroblasts作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：刘芳芬临床医学皮肤病与性病学湘雅医院谢红付教授李吉副研究员论文答辩日期丝垦：!!!!答辩委员会主席显幺中南大学二。一三年十一月万方数据学位论文原创性声明lItllllllllllllltlllt

2、HMtllllltllY2686023本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：立阵曰期：业年旦月兰日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：

3、即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：单日期：竺!≥年L月型日导师签名：万方数据本课题受以下基金资助：国家自然科学基金(NO．81271775，81171520)，中国高等院校博士学科点科研基金(20100162l10035)，中国博士后科学基金(2012M511421)，湖南省科学技术厅科研基金(20l2W

4、K3045)．万方数据中南大学博士学位论文中文摘要水通道蛋白3与人皮肤成纤维细胞光老化的机制研究摘要：水通道蛋白3(Aquaporin3，AQP3)是一种能快速跨膜转运水、甘油和尿素等小分子物质的膜整合蛋白，在皮肤的屏障功能、水的保存中起重要作用。AQP3不但参与细胞的增殖、分化与迁移，与皮肤细胞的衰老相关，而且还能够通过调节H：0：的透膜吸收，进而影响细胞内的信号传递网络。自噬是细胞内主要的异化途径，维持细胞稳态，参与衰老以及与衰老相关的各种生理病理过程。但随着年龄的增长，细胞内自噬功能逐渐减弱，导致细胞适应外

5、界环境和自身防御反应的能力降低，细胞稳态发生变化。细胞光老化过程中，UVA辐射细胞产生的ROS可诱导自噬及细胞衰老，而衰老的细胞中，自噬功能减弱，ROS对细胞造成的损伤得不到清除而不断积累，进一步加重细胞衰老。而H：0：作为ROS的重要组成成分，可被AQP3跨膜转运，由此，我们推测：AQP3与自噬在NHSFs光老化过程中可能存在某些联系。本研究的第一部分中，我们首先采用组织块真表皮分离法原代培养正常人皮肤成纤维细胞(NHSFs)，利用320-400nm波长范围的UVA辐射NHSFs，构建光老化细胞模型。再行慢病毒

6、转染AQP3shRNA和AQP3cDNA质粒，成功构建不同AQP3表达量的NHSFs稳定细胞株。最后行B一半乳糖苷酶染色、Western-blot(wB)和RT-PCR等技术检测衰老相关指标及光老化过程中AQP3水平的变化；行透射电镜、免疫荧光染色(IF)以及Western—blot等技术检测自噬水平。研究发现：(1)小剂量UVA单次辐射NHSFs，不能诱导细胞衰老，但AQP3表达增高；小剂量UVA重复5天辐射NHSFs，可诱导细胞衰老，此时AQP3表达下降；(2)降低表达AQP3的NHSFs出现衰老表型，接受小

7、剂量的UVA单次辐射可加重衰老；而过表达AQP3可使NI-ISFs在接受小剂量UVA重复5天的剂量辐射时的衰老减轻；(3)小剂量UVA单次辐射NHSFs，细胞自噬水平增高；小剂量UVA重复5天辐射NHSFs，自噬水平下降；(4)降低表达AQP3的NHSFs，自噬水平降低，小剂量的UVA单次辐射可使自噬水平进一步降低；而过表达AQP3，使NHSFs的白噬水平增加，在接受小剂量UVA重复5天的剂量辐射时的亦可减轻万方数据中南大学博士学位论文中文摘要白噬水平的降低。该部分研究初步明确了，AQP3通过影响细胞白噬，在人皮

8、肤成纤维细胞光老化过程中的发挥保护性作用。为进一步明确AQP3通过影响自噬参与细胞光老化过程的具体机制，在第二部分的研究中，我们利用前期构建的光老化细胞模型和稳定转染的细胞株，使用H20。抑制剂，以及三条MAPKs途径中各磷酸化蛋白分子的抑制剂，检测了细胞内H：0：水平，以及ERKl／2／、JNK／SAPK、p38MAPK及mTOR磷酸化水平／总蛋白水平以及LC3II／I