未折叠蛋白反应在小鼠再灌注肺凋亡中的作用和机制

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目查蚯叠蛋自厦廑查型!鼠要灌注韪迥圭虫的佳旦塑机制答辩委员会主席筮正猃塾援答辩委员会成员遏州直主医院塞』圈』主堡显刿医型太堂附厘二瞳奎垂芏塾援湿刿医型太堂随届』L童医院矍运查塾援湿州直厶垦医院昱厦簦主任万方数据温州医科大学硕士学位论文目录论文中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6刖吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯b材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21：口木⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯‘上分析和讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．38结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一46致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一47综述正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．56、J、J、，、J、J一二三四。五，I＼，f＼，f～，-～，-＼万方数据温州医科大学硕士学位论文未折叠蛋白反应在小鼠再灌注肺凋亡中的作用和机制中文摘要目的：探讨未折叠蛋白反应在再灌注肺凋亡中的作用，并分析其可能

3、机制。方法：采用C57BL／6Jt]、鼠在体单侧肺原位缺血再灌注损伤模型。实验小鼠70只，随机分为7组，每组10只：假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I瓜组)、PBS+Lipofectamine2000TM转染试剂组(FR+PBS+Lipo组)、阴性对照组(I／R+siRNASCR组)、UR+siRNACHOP组，UR+siRNAcaspase一12组，I／R+siRNAJNK组。Sham组：只开胸不夹闭肺门，观察3．5h后处死并取左肺；I／R组缺血30rain，再灌注3h；I／R+PBS+Lipo组：给予PBS溶液和

4、Lipofectamine2000TM转染试剂，余同I瓜组；I／R+siRNASCR组：给予PBS溶液、Lipofectamine2000TM转染试剂和Lipofectarnine20001M转染试剂包裹的无关序列的siRNA(能进入RNAi途径，但无干扰作用)，余同I／R组；I瓜+siRNA组：给予PBS溶液、Lipofectamine2000TM转染试剂和Lipofectamine2000TM转染试剂包裹的不同目的siRNA，余同I／R组。于实验前2天通过鼻饲法干扰小鼠。各组小鼠被处以安乐死，取左肺组织，进行肺组织光镜

5、检测，检测总肺水含量(TLW)、肺湿干重比(w／D)和肺泡细胞损伤定量指标(IQA)，分别用半定量逆转录一聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法检澳tJCHOP、caspase一12、JNK基因水平的表达以及蛋白含量，通过电镜观察肺组织学改变，通过原位缺口末端标记法在显微镜下观察肺万方数据温州医科大学硕士学位论文组织凋亡细胞。结果：1．Sham组W／D、TLW及IQA值较之其他组有显著性差异(P<0．05)，为所有组中湿干重比值最低。经CHOP—siRNA、caspase一12一siRNA、JNK—siRNA干预后，I／R+siRN

6、Ac．op组、UR+siRNAcaspase．12组、I／R+siRNAjNK组W／D、TLW及IQA值下降，差异有统计学意义(P<0．01)；2．Sham组肺泡细胞无肿胀，结构完整，肺问质未见炎性细胞漏出，无水肿渗出、增厚。I／R组、UR+PBS+Lipo组和I／R+SCR组肺泡细胞肿胀、结构紊乱，肺泡间质水肿、增厚，肺泡腔内可见渗出、红细胞漏出及炎性细胞漏出。与之相比，I／R+siRNAc．oP组、UR+siRNA。。。pas。．12组、I／R+siRNAINK组肺泡结构的紊乱程度减轻，可见较完整的形态，肺间质及肺泡内

7、渗出减轻及炎性细胞较之减少；3．Sham组毛细血管基底膜无破坏，内皮细胞未见肿胀，结构完整清楚，II型肺泡上皮细胞内线粒体无肿胀，微绒毛丰富，板层小体数量未见减少。I／R组、UR+PBS+Lipo组和UR+SCR组细胞细胞膜上微绒毛减少或消失，胞浆浓缩，板层体减少、排空增多，线粒体肿胀，细胞核固缩并边集在核膜下，可见较多炎性细胞浸润附着在毛细血管内壁及肺泡隔上。与上述3组相比，I／R+siRNAcHoP组、I／R+siRNA。。。pas。．12组、I／R+siRNAjNK组肺组织在电镜下可见损伤减轻，肺泡结构’超微结构清晰

8、可辨，核染色质较均匀，胞浆增多，肺泡II型上皮细胞表面微绒毛较多，板层小体数量增多，线粒体肿胀减轻；4．与Sham组相比．I／R组、I／R+PBS+Lipo组和I／R+SCR组中的CHOP、caspase一12、JNK基因及CHOP、caspase一12、p-JNK蛋白水平均明显表达’(尸<0．01)。