重组人生长激素对大鼠背部创面愈合的影响及机制研究

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1、单位代码10475申请编号10475201400227分类号R363硕士学位论文（同等学力）重组人生长激素对大鼠背部创面愈合的影响及机制研究学科、专业：基础医学、病理与病理生理学研究方向：创伤修复申请学位类别：医学硕士申请人：薛继东指导教师：黄红莹教授二〇一七年六月TheEffectAndMechanismofRecombinantHumanGrowthHormoneonSDRatsBackWoundHealingADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRe

2、quirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByXueJidongSupervisor:Prof.HuangHongyinghuanDateJune2017摘要研究背景：在临床上，各种创伤导致的皮肤软组织缺损非常常见，主要包括外伤、手术等急性创面以及因各种因素导致软组织缺损经久不愈的慢性创面。创面愈合的过程非常复杂，存在多个病理生理进程，而这个过程需要角质细胞、成纤维细胞、内皮细胞、等多种细胞的参与，也需要多种炎症因子和生长因子的调节。而寻找促进创面快速愈合的方法也一直是国内外学者长期以来的研究重点。因此，通过深入了解创面愈合的机制进行进一步的研

3、究，探索促进创面愈合的新途径是目前急需解决的重大临床问题之一。重组人生长激素（RecombinantHumanGrowthHormone,rh-GH）是使用基因工程技术生产的生长激素类药物。以往关于生长激素的研究主要集中于生长发育、改善危重患者机体蛋白质代谢等方面，近年来还发现，生长激素在创面愈合中也发挥着重要作用。rh-GH可加速成纤维细胞增殖，并调节IGF-1的表达。这提示GH可以促进表皮细胞的迁移，加速创面的上皮化从而促使创面快速愈合，因此，我们在基于国内外对于GH疗效观察研究的基础上，进一步进行机制研究和探讨。目的：本研究拟通过在大鼠背部创面周围局部注射rh-GH来调控创面

4、局部GH水平，观察GH在创面愈合中的作用，并对其可能机制进行进一步研究。方法：1.取SD大鼠20只，随机分为4组，一组为对照组，其余三组为药物注射组，每组5只，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后予以背部脱毛。在大鼠背部制备2×2cm2全层皮肤缺损模型。创面制作完成后，立即在对照组大鼠背部创面周围以四点法注射生理盐水，在实验组创面周围注射rh-GH，三组注射剂量分别为0.1IU/kg、0.3IU/kg、0.5IU/kg，隔日注射一次。观察创面愈合速度差异，对比分析并制作创面愈合率曲线，同时监测大鼠血糖变化情况进行分析。2.取SD大鼠60只，随机分为2组，每组30只，腹腔注射麻醉后脱毛处理。在大

5、鼠背部皮肤缺损模型同前。创面制作完成后，立即在对照组大鼠背部创面周围以四点法注射生理盐水，在实验组创面周围注射rh-GH，48小时后取创缘组织行免疫组织化学（IHC）实验，检测创缘GH变化。其后隔一天在创缘予以药物注射，直至创面完全愈合，相机拍照记录创面愈合进展。I3.留取大鼠正常皮肤组织标本为对照，并分别于创面处理后第0、2、4、7、10、14天取创缘组织（14d已愈合者不取材），以Western-Blot方法检测创周组织中GH蛋白水平变化。4.留取大鼠正常皮肤组织标本为对照，并分别于创面处理后第0、2、4、7、10、14天取创缘组织（14d已愈合者不取材），并以RT-PCR法检

6、测创周组织中EGF、FGF、VEGF的表达变化，同时检测大鼠血清中白蛋白及血糖水平变化。结果：1.与创缘单纯注射生理盐水的对照组相比，三个注射rh-GH的实验组创面上皮化速度明显增加，愈合速度加快。提示rh-GH在创面愈合过程中有促进创面上皮化的作用。2.三个实验组愈合时间比较，对照组愈合时间为20.8±2.28天，rh-GH低剂量组为17.2±1.93天，rh-GH中剂量组为16.0±1.41天，rh-GH高剂量组为15.8±2.04天。统计学分析中、高剂量组愈合时间比对照组及低剂量组均增快，且差别有统计学意义（P<0.05），但是注射rh-GH的中等剂量组和高等剂量组创面愈合时

7、间差异无统计学意义（P>0.05）；血糖检测结果显示实验组血糖水平在各时间点均高于对照组，且血糖水平与rh-GH注射剂量呈正相关。3.制作大鼠背部创面模型并注射实验试剂48小时后取材，免疫组织化学染色结果显示创缘组织GH染色呈阳性，与对照组相比，注射rh-GH的实验组创缘GH染色显著增强。提示创周注射rh-GH可以增高局部GH水平。4.创缘组织中GH的Western-Blot结果显示：生理盐水注射组及rh-GH注射组的GH水平在初期均明显升高，但rh-GH注射组的GH