贝莱斯芽孢杆菌DY-6的抑菌特性及其对刺参生长免疫和池塘菌群结构的影响研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M150150276上海海洋大学硕士学位论文题目：贝莱斯芽孢杆菌DY-6的抑菌特性及其对刺参生长免疫和池塘菌群结构的影响研究StudyonAntibacterialCharacterizationof英文题目：BacillusvelezensisDY-6andItsInfluenceontheGrowthandImmunityActivitiesofApostichopusjaponicusandtheMocrobiotaintheCulturePond专业：渔业研究方向：微生态学姓名：王金燕指导教师：王印庚研究员二O一八年四月上海海洋大学学位论文

2、原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采

3、用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩地点答辩时间贝莱斯芽孢杆菌DY-6的抑菌特性及其对刺参生长免疫和池塘菌群的影响研究StudyonAntibacterialCharacterizationofBacillusvelezensisDY-6andItsInfluenceontheGrowthandImmunityActivitiesofApostichopusjaponicusandtheMocro

4、biotaintheCulturePond学位论文完成日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：上海海洋大学学位论文贝莱斯芽孢杆菌DY-6的抑菌特性及其对刺参生长免疫和池塘菌群结构的影响研究摘要进入21世纪，刺参养殖业迅猛发展。池塘养殖模式是在山东、辽宁、河北和福建等地区是刺参的主要模式，由于池塘养殖过程中刺参放养密度大、养殖工艺落后、池塘清淤周期长等问题，导致池塘中的生态环境失衡，疾病频发，而使用益生菌，则可以避免上述问题。本文开展了刺参养殖系统中拮抗病原菌的本土益生菌筛选、生理特性及抑菌蛋白的分离纯化等分析，分析了益生菌的最佳使用浓度及其对刺参非特异性免疫酶活力和肠道菌群结构的

5、影响，最后探索分析了益生菌的添加对池塘水质和菌群结构的影响，并对所筛选的菌株进行了全基因组测序研究，以期为益生菌的正确使用提供理论依据。1、一株贝莱斯芽孢杆菌（Bacillusvelezensis）的分离及其生理特性研究2014年5月，从东营的刺参(Apostichopusjaponicus)养殖池塘环境中对水样和底泥样品进行了益生菌的筛选，共获得了66株可培养细菌。以刺参“腐皮综合征”主要致病菌为指示菌进行拮抗作用实验，使用选择培养基对菌株的产淀粉酶和蛋白酶能力进行测定，筛选获得一株潜在益生菌株DY-6，并进行了生理生化实验、16SrDNA序列分析、菌株生长特性及其对刺参的安全

6、性研究。结果表明：DY-6对其指示菌假交替单胞菌(Pseudoalteromonasnigrifaciens)、灿烂弧菌(Vibriosplendidus)、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)和溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)均有良好的抑制作用，抑菌圈分别达到24mm、22mm、27mm和37mm，对淀粉和蛋白培养基的水解直径分别为28mm和20mm。利用该菌对刺参进行高浓度胁迫实验测试其安全性，实验期间浸浴组和投喂组的刺参状态良好，没有发病和死亡现象。利用细菌生理生化和16SrDNA序列分析表明，DY-6与贝莱斯芽孢杆菌(Bacillu

7、svelezensisCP015911)的相似性为99%。因此，初步鉴定该菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)。同时，将该菌株与商品化微生态制剂产品中分离的4株益生菌进行了比较，DY-6在温度20~35℃、盐度0~35范围内其生长较快，优于上述4II上海海洋大学学位论文株菌，4h进入对数生长期，10h达到生长高峰。筛选的贝莱斯芽孢杆菌DY-6(BacillusvelezensisDY-6)具有良好抑菌能力，生长速度快，并且具有广温广盐的优点，不仅能够降低疾