营养条件对绿僵菌生长特性和抑菌活性的影响

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1、研究报告*营养条件对绿僵菌生长特性和抑菌活性的影响112齐永霞，陈方新，李增智1(安徽农业大学植物保护学院，安徽合肥，230036)2(安徽农业大学微生物防治重点实验室，安徽合肥，230036)摘要研究了不同培养基、碳、氮营养对金龟子绿僵菌菌落直径、菌丝生物量、分生孢子产生量及其次生代谢产物对植物病原真菌的抑菌活性。发现金龟子绿僵菌的菌丝线性生长以PSA、麦芽糖和酵母最好，以Czapek、甘露醇和脲最差;菌丝生物量以PSA、白砂糖和蛋白胨最大，以Czapek、乳糖和脲最小;分生孢子产生量以PSA、

2、麦芽糖和KNO3最多，以Czapek、甘油和硫酸铵最少。代谢液的抑菌活性实验结果表明，在不同培养基培养的代谢液中，Czapek的抑菌效果最好，SDAY的抑菌效果最差。在不同碳营养培养的代谢液中，白砂糖的抑菌效果最好，乳糖的抑菌效果最差。在不同氮营养培养的代谢液中，蛋白胨的抑菌效果最好，脲的抑菌效果最差。关键词碳营养，氮营养，金龟子绿僵菌，生物学特性，抑菌活性绿僵菌属［Metarhizium(Metsch)Sorokin］真菌是1.1.1供试菌株种广泛应用的昆虫病原真菌，也是最早用于生物防治金龟子绿

3、僵菌(Metarhiziumanisopliae)Ma55，由［1］的虫生真菌之一。绿僵菌的寄主范围非常广泛，安徽农业大学微生物防治重点实验室提供;棉花枯萎能寄生8个目42个科200多种昆虫，还能寄生螨类病菌(Fusariumoxysporumf．sp．vasinfectum)、小麦纹［2－4］及线虫等。该菌具有对目标害虫致病力强、防治枯病菌(Rhizoctoniacerealis)、辣椒疫霉病菌(Phyto-效果好，对人、畜、农作物无毒害作用及与环境兼容等phthoracapsici)，由安徽农

4、业大学植保学院植病教研优点，因而在害虫生物防治方面具有广阔的应用前室提供。景。在澳大利亚、加拿大、美国、巴西等国都已有商业1.1.2供试培养基［5－8］化生产绿僵菌菌剂，用于防治农林害虫。在国［16］Czapek培养基，PDA培养基，PSA培养基，内，绿僵菌也先后在多种农林害虫上进行过防治试［17］SDAY培养基，PPDA培养基。［9－13］验，防治效果明显，但尚未见规模化生产。1.2培养基对Ma55生长特性及代谢液抑菌活性的目前，人们已经确立了绿僵菌在害虫生物防治中影响所占的重要地位，但因为绿僵

5、菌菌种在继代培养和转1.2.1培养基对Ma55菌丝生长的影响管的过程中经常发生变异，出现菌落局变、产孢量下供试Ma55菌株在PPDA平板上25℃恒温培养5降、致病力减弱等现象，限制了绿僵菌的大规模生产d后，用打孔器(直径6mm)沿菌落边缘打菌碟，分别及应用。另外，绿僵菌在害虫生物防治中具有广泛的接种到等量的PDA、PSA、SDAY和Czapek培养基平用途，而有关绿僵菌防治植物病害的研究报道极［14－15］板中央，每个处理重复3次，置于25℃的恒温条件下少。本研究在碳营养筛选的基础上，测定了不培养

6、，每天观察菌落的生长、色泽、形态和产孢等情同氮营养对金龟子绿僵菌菌丝生长、分生孢子产生量及菌丝生物量的影响，同时分析了不同营养成分的液况，在培养到第5天时采用十字交叉法每日测量菌落体培养基培养的金龟子绿僵菌代谢液对棉花枯萎病生长直径。等植物病原真菌的抑菌活性，为进一步研究金龟子绿1.2.2培养基对Ma55分生孢子产生量的影响僵菌对植物病害的生物防治提供实验依据。将1.2.1处理中的培养物继续培养至15d时，用打孔器从每一菌落的中心点至边缘距离的1/2处1材料和方法打取菌碟，每个处理重复3次。打好的

7、菌碟放入灭菌1.1材料后的三角瓶中，加入无菌的0.05%吐温－80水溶液20mL，经磁力搅拌器搅拌10min，获得各处理的分生第一作者:讲师，在读博士(李增智教授为通讯作者)。孢子悬浮液。利用血球计数板测定分生孢子产生量。*国家自然科学基金(30972368)收稿日期:2011－01－17，改回日期:2011－03－301.2.3培养基对Ma55菌丝生物量的影响2011年第37卷第7期(总第283期)51食品与发酵工业FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES培养液配方同1.2.1

8、(不加琼脂)。培养液配制1.3.4碳营养对Ma55代谢液抑菌活性的影响好后分装在500mL的三角瓶中，每三角瓶中装200发酵液制备方法和抑菌活性测定方法参照mL，接入培养好的Ma55菌碟10块，置于25℃恒温1.2.4.摇床，120r/min，连续培养15d。布氏漏斗真空抽1.4氮营养对Ma55生长特性及代谢液抑菌活性的滤，分离菌丝体和发酵液。所得菌丝体置于65～影响70℃烘箱中烘至恒重后称其重量，发酵液收集后放置1.4.1氮营养对Ma55菌丝生长的影响于4℃冰箱中保存备用。在碳源