猪DFATs成脂再分化与成肌转分化和分化早期Fad24的表达

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1、分类号密级UDC单位代码10435硕士学位论文猪DFATs成脂再分化与成肌转分化和分化早期Fad24的表达PorcineDFATsadipogenicdifferentiationandreexpressionmuscletransdifferentiationanddifferentiationinearlyFad24研究生姓名胡晓丽指导教师宋学雄教授学科专业基础兽医学研究方向发育生物学中国.青岛二0一八年六月PorcineDFATsadipogenicdifferentiationandreexpressionmuscletransdifferentiationanddif

2、ferentiationinearlyFad24ThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyHuXiaoli（InstituteofAnimalMedicine）Supervisor:SongXuexiongQingdao.ChinaJune,20182独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的

3、研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日青岛农业大学硕士学位论文摘要摘要本研究旨在明确猪

4、去分化脂肪细胞（dedifferentiatedadipocytes,DFATs）成脂再分化与成肌转分化早期脂肪分化因子24（factor24foradipocytedifferentiation,Fad24）的表达模式，为证实Fad24为猪DFATs成脂再分化与成肌转分化启动的共性开关蛋白的研究奠定基础。研究采用“天花板培养”分离培养猪DFATs，用成脂诱导方法诱导猪DFATs成脂再分化，油红O染色和显微镜观察鉴定；用三种成肌诱导方法诱导猪DFATs的成肌转分化，显微镜观察进行形态学鉴定，间接免疫荧光法检测成肌细胞特异蛋白肌间线蛋白（Desmin）和肌球蛋白重链（myosin

5、heavychain,MyHC）的表达,用实时荧光定量PCR技术检测成肌特异基因肌红蛋白（myoglobin,MyoG）mRNA的表达等；用实时荧光定量PCR技术分别检测猪DFATs成脂再分化和成肌转分化早期Fad24的表达模式。实验结果如下：1.猪DFATs成脂再分化诱导将猪DFATs诱导成脂再分化，诱导3d时长梭状的DFATs开始变短，胞质中出现了少量且较小的亮泡状结构，经油红O染色鉴定证实为脂滴。随着诱导时间的增加，细胞质中的脂滴逐渐增多和增大。2.猪DFATs成肌转分化诱导本研究采用三种在不同动物和不同细胞中诱导成肌转分化的方法，比较诱导猪DFATs成肌转分化的效果，旨

6、在筛选诱导猪DFATs成肌转分化的较优方法。三种诱导成肌分化的方法包括，糖皮质激素（glucocorticoid,Glc）法、半乳糖凝集素-1（Galectin-1）法、5-氮杂胞苷（5-Aza-2'-deoxycytidine,5-aza）法。用三种方法分别诱导猪DFATs成肌转分化6d、15d和21d，分别用倒置显微镜观察分化的细胞形态；诱导21d后用间接免疫荧光法检测Desmin和MyHC的表达，用Real-timeRT-PCR检测MyoGmRNA的表达。诱导后的细胞形态学观察显示，Galectin-1法诱导的肌管形态最佳，多核细胞数量也最多；5-aza法次之，但诱导过程

7、中细胞死亡率较高；Glc法诱导的细胞形态不规则，多形成放射状突起，而且出现较多成脂转分化细胞。间接免疫荧光分析显示，Galectin-1法和Glc法诱导的成肌细胞，Desmin和MyHC都呈强阳性表达，而在5-aza法诱导的细胞呈弱表达。Real-timeRT-PCR检测显示，Galectin-1法和Glc法诱导的成肌细胞MyoGmRNA表达量都很高，而5-aza法诱导的细胞MyoGmRNA表达量显著（p<0.05）低于Galectin-1法和Glc法。从诱导细胞的肌管形态、生存能力、特异蛋