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时间:2019-03-09
《桃果实中类胡萝卜素合成相关转录因子的克隆及其对蓝光响应研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、学校代码:10264研究生学号:M150208364上海海洋大学硕士学位论文桃果实中类胡萝卜素合成相关转录因子题目:的克隆及其对蓝光响应研究MolecularCloningofTranscriptionFactorsRelatedtoCarotenoids英文题目:SynthesiswhichResponsetoBlueLightinPeachFruit专业:食品科学与工程研究方向:果实采后生理与分子生物学姓名:沈子明指导教师:杨震峰教授二O一八年五月二十四日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明:我恪守学
2、术道德,崇尚严谨学风。所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写,我对所写的内容负责,并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:日期:年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或
3、部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□,在3年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注王强浙江大学宁波理工学院教授吴月燕浙江万里学院教授王忠华浙江万里学院教授胡松浙江万里学院讲师答辩地点生环学院64#320会议室答辩日期5月24日上海海洋大学硕士学位论文桃果实中类胡萝卜素合成转录因子的克隆及其对蓝光响应研究摘要黄肉桃果实中类胡萝卜素的含量
4、和组成不仅决定果实外观色泽和商品性,而且在清除自由基、提高免疫力、预防心血管疾病和防癌抗癌等方面也起着重要作用。蓝光能有效提高采后贮藏过程中桃果实类胡萝卜素的积累量,但是具体调控机制还不清晰。为此本文以黄肉桃‘金丽’为研究材料,利用生物信息学手段从桃基因库中筛选出调控类胡萝卜素合成的转录因子候选基因,并对其进行时空表-2-1达分析;研究40μmol·m·s蓝光处理对桃果实在贮藏期间果实品质、类胡萝卜素合成基因及转录因子候选基因表达量的影响;利用分子生物学技术进一步分析类胡萝卜素合成转录因子对短时蓝光照射的响应机
5、制,以期为揭示蓝光调控桃果实中类胡萝卜素合成的具体分子机制提供理论依据。具体研究结果如下:(1)利用生物信息学的方法,从桃果实基因库中筛选出13个调控类胡萝卜素合成的候选转录因子:PpSEP1、PpFUL、PpAGL、PpSNAC1、PpSANC4、PpCNAC1、PpbHLH147、PpPIF3、PpHY5、PpGLK2、PpRAP2.2、PpSGR1、PpSGRL。氨基序列分析结果表明,这些同源基因不仅具有所属家族的特征保守域,同时含有靶序列特有的保守域。转录因子的时空表达分析结果表明,除PpSNAC1和P
6、pSGRL外,其余转录因子在果实中表达量较高。这些结果表明这些转录因子可能参与调控果实中类胡萝卜素的合成。(2)研究了蓝光对桃果实贮藏过程中果实品质、类胡萝卜素合成基因及转录因子候选基因表达量的影响。结果表明蓝光促进果实内源乙烯释放,加速果实软化,这可能是蓝光处理果实贮藏后期PpSEP1、PpFUL、PpAGL表达量增加的重要原因之一。蓝光处理提高了果实中MDA含量、游离脯氨酸含量和可溶性蛋白含量。蓝光处理通过提高果实中β-胡萝卜素、β-隐黄质和玉米黄质的含量,促进总类胡萝卜素的积累。蓝光处理抑制了果实中PpP
7、IF3表达量,提高了PpHY5和类胡萝卜素合成基因PpPSY的表达量。(3)研究了类胡萝卜素合成转录因子对0-6h短时蓝光照射的响应机制。结果表明,1-6h蓝光照射抑制了整个桃果实中PpPIF3表达量,3-6h蓝光照射提高了整个桃果实中PpHY5表达水平。酵母双杂交的结果表明,PpPIF3能与成熟相关I上海海洋大学硕士学位论文转录因子以及蓝光受体蛋白PpCRY2、类胡萝卜素关键限速基因PpPSY互作,但是这种互作在蓝光照射下消失。LUC/REN双荧光素报告基因试验结果表明,PpSEP1和PpHY5转录因子均能识
8、别激活PpPSY启动子,PpSEP1与PpHY5协同表达提高了单个转录因子对PpPSY启动子的转录活性。PpPIF3转录因子对PpPSY启动子的活性具有抑制作用,PpPIF3基因的协同表达抑制了PpSEP1和PpHY5对PpPSY启动子的激活作用。这些结果表明PpPSY启动子活性受PpPIF3和PpHY5转录因子的拮抗调控,而蓝光处理通过降低PpPIF3表达量,减弱PpPIF3对PpP
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