interleukin23基因在毕赤酵母中诱导表达

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1、中文摘要Interleukin23基因在毕赤酵母中的诱导表达摘要背景：作为一个在结构和功能上同白介素．12类似的细胞因子——白介素．23，在近期已经成为细胞因子研究中的热点。白介素．23是由活化的I型巨噬细胞和树突状细胞分泌，在记忆性T淋巴细胞的分化和增殖过程中起重要作用。它还是连接固有免疫应答和适应性免疫应答的桥梁。已有研究证实白介素一23与几类炎性疾病的发生密切相关，比如类风湿性关节炎、肠炎、幽门杆菌引起的胃炎、牛皮癣、银屑病等。白介素．23诱导Thl型免疫应答的能力是其与炎性疾病发生相关的基础。此外，细胞因子白介素．2

2、3和白介素一12部分地决定了免疫应答的走向是Thl7还是Thl类型。越来越多的研究表明了细胞因子白介素．23在免疫系统中的重要作用。目的：为了进一步研究白介素．23的免疫学功能，构建了白介素．23毕赤酵母菌表达质粒并进行了表达。方法：使用Invitrogen公司的EasySelectlMPich．iaExpressionKit系统中的毕赤酵母菌株X一33和质粒p-PICZot．A，分别经由载体构建、转化、筛选、诱导和检测等步骤获得能够表达白介素．23的酵母克隆。结果：通过overlapPCR，成功将白介素．23的两个亚基p1

3、9、p40连接，并在两亚基连接处添加有由5个柔性氨基酸构成的连接子。将含有p19、p40cDNA克隆至分泌型表达载体pPICZot—A。获得的阳性克隆，使用兔抗his一抗，中文摘要行Westernblot检测，发现在诱导的上清中仅在24h、36h诱导的两个时间点中能检测到72kd位置的条带。而沉淀中24h后的时间点中均可检测到少量表达。结论：成功构建了白介素，23的毕赤酵母表达载体并初步获得了能表达白介素．23的酵母菌株。为进一步要展开的针对白介素．23活性研究打下了良好的基础。关键词：白介素一23；毕氏酵母；克隆；质粒；表

4、达英文摘要ExpressionofInterleukin23inPichiapastorisABSTRACTBackground：IncreasingevidencehasrevealedtheimportantionofIL一23，whichcloselyresemblesIL．12bothstructurallyandimmunologically，inlinkinginnateandadaptiveimmunity．IL·23，producedbyactivatedtype1macrophagesanddendriti

5、ccells(DC)，possessesuniquerolesinthedifferentiationandexpansionofmemoryTcells．IL一23hasbeenassociatedwithseveralinflammatorydiseasessuchasrheumatoidarthritis，inflammatoryboweldisease(IBD)andHelicobacterpyloriassociatedgastritis，mainlyduetoitscapacitytoinduceastrongT

6、hltypeimmuneresponse．IL-23isalsoassociatedwithThl7responsesandthecytokineproducedbytheantigenpresentingcells(APC)，i．e．IL一12andIL-23determinethetypeofimmuneresponsepartly．ThlorThl7．MoreandmoreresceachhaveshowedthatIL．23ownanimportantroleinimmunesystem．Purpose：Inorde

7、rtostudytheimmunefunctionsofcytokineIL一23further，plasmidofIL-23inPichiawasconstructedandtheproteinwasexpressed．Methods：X-33andplasmidpPICZⅨ一AofEasySelectTMPichiaExpressionKitfromInvitrogenwereusedfortheexprssionofinterleukin23．Thetechniques，includingcontruction，ele

8、ctroporation，screeningandinductionofprotein英文摘要expressionwereusedtoidentitytheexpressionclonesofIL．23．Results：ThetwosubunitsofIL一23，p19andp40，wer