蝙蝠蛾拟青霉与冬虫夏草关系的分子系统学研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com药学学报ActaPharmaceuticaSinica2008，43(4)：421—426·42l·蝙蝠蛾拟青霉与冬虫夏草关系的分子系统学研究杨金玲，肖薇，何惠霞，朱慧新，王淑芳，程克棣，朱平(中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所卫生部天然药物生物合成重点实验室，北京100050)摘要：以5月和6月两个不同时段采集的分别产于青海省化隆县和四川省康定县的冬虫夏草(Cordycepssinensis)新鲜子实体为材料，采用分子生物学方法，以rDNA—ITS序列为分子标记，对蝙蝠蛾拟青霉(P

2、aecilomyceshepiali)与冬虫夏草之间的关系进行了探讨。以真菌通用引物ITSI／ITS4分别对蝙蝠蛾拟青霉及冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA进行PCR扩增，获得的片段克隆到pMDI8一TVector上进行测序，结果表明，随机挑取的46个克隆与某些已在GenBank中注册的中国被毛孢(HirsuteUasinensis)或冬虫夏草的rDNA—ITS序列的一致性均在99％以上，但与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA—ITS序列的一致性约为72％。根据蝙蝠蛾拟青霉的rDNA—ITS序列设计了两对特异引物，分别以不同产地及不同生长时期共4个批次

3、的冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA为模板，进行PCR及巢式PCR扩增，均得到了相应片段，该片段与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA—ITS序列具有100％的一致性。在GenBank中注册号为AB067740的另一个标明为冬虫夏草的rDNA—ITS序列与注册号为AJ309353的中国被毛孢的rDNA—ITS序列一致性仅为87．3％，但根据AB067740序列设计特异引物，也从冬虫夏草基因组DNA中扩增到其相应序列。研究结果表明，在天然冬虫夏草中除了中国被毛孢之外，还普遍存在着蝙蝠蛾拟青霉等内寄生菌。关键词：蝙蝠蛾拟青霉；冬虫夏草；中国被毛孢；rDNA—

4、ITS区；系统发育分析中图分类号：R915文献标识码：A文章编号：05l3—4870(2008)04—0421—06MolecularphylogeneticanalysisofPaecilomyceshepiafiandCordycepssinensisYANGJin-ling，XIAOWei，HEHui-xia，ZHUHui-xin，WANGShu-fang，CHENGKe-di，ZHUPing(KeyLaboratoryofBiosynthesisofNaturalProducts，MinistryofHealth，Institu

5、teofMateriaMedica，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege，Beijing100050，China)Abstract：PhylogeneticrelationshipbetweenPaecilomyceshepialiandCordycepssinensiswasstudiedbyanalyzingthesequenceofrDNA-ITS．ThesamplesofC．sinensiswerecollectedfromHualongCount

6、yinQinghaiProvinceandKangdingCountyinSichuanProvinceinMayandJune，respectively．TherDNA-ITSfragmentswereobtainedbyPCRamplificationwiththetemplategenomicDNAofthefreshstromaorcaterpillarbodyofthecollectedsamplesandtheculturedmyceliumofP．hepiali，withtheuniversalfungalprimersI

7、TS1／ITS4．TheamplifiedfragmentswereclonedintopMD18-TVectorandsequenced．PhylogeneticanalysiswasperformedwiththesesequencesandthosefromGenBank．Theresultshowedthatallofthe46clonesrandomlychosenfromtheamplificationofC．sinensissharedidenticaloralmostidenticalrDNA．ITSregionsand

8、hadover99％identitywithsomerDNA·ITSsequencesofHirsuteUasinensisandC．sinensisregisteredinGenBank，butallof