贡嘎蝙蝠蛾粉拟青霉的遗传多样性及生物学特性研究

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1、万方数据SichuanAgriculturalUniversityMasterDegreeDissertationStudiesongeneticdiversityandbiologicalcharacteristicsofPaecilomycesfarinosusBYShenHuirongSupervisor￥鱼坠』i墅i坠2￡!：Q!垒墨墨Q￡MajorSpecialization丛曼堕i￡i坠垒!乜!垒坠!立i墨星窒璺金墨．AgriculturalUniversity，Chengdu，611130，P．R．ChinaMay2014万方数据论

2、文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：申趟柬2汐，伞年5月，2日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印

3、、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。d，本论文不保密。口本论文保密，在一年解密后适用本授权。(请在以上口内划“√”)研究生签名：导师签名1中道柬乡乏叶2口，牟年占月12日，c)J／驴年6月谚日万方数据说明本研究为国家自然科学基金应用基础项目“人工繁育冬虫夏草寄主昆虫拟青霉病的分子流行病学研究”(项目编号：81173479)部分内容，受国家自然科学基金资助和项目管理。万方数据四川农业大学硕士学位论文摘要由粉拟青霉菌(Paecilomycesfarinosus)引起的

4、贡嘎蝙蝠蛾(Hepialusgonggaensis)拟青霉病是贡嘎蝙蝠蛾人工繁育过程中面临的主要病害之一。为明确贡嘎蝙蝠蛾拟青霉病的传播途径及病原变异，本文利用ISSR分子标记方法对82株采自不同虫态发育时期及其相应生长环境介质中的粉拟青霉菌株进行了遗传多样性研究和生物学特性差异研究，以期为有效控制蝙蝠蛾拟青霉病提供预测和防治依据。研究结果如下：1．粉拟青霉菌遗传多样性分析构建粉拟青霉菌ISSR-PCR扩增反应体系并进行粉拟青霉菌遗传多样性分析。以粉拟青霉菌的基因组DNA为模板，采用正交设计方法(L16(431)对ISSR-PCR反应体系中的引物

5、、Zaq酶、模板、PCR反应MIX混合液等4个重要参数进行了优化，初步建立了适合粉拟青霉菌的ISSR．PCR反应体系，即25“LPCR反应体系中，模板DNA70ng、引物0．5I．tmol／L、PCR反应MIX混合液8¨L、Taq酶lU。应用该优化体系从20个ISSR通用引物(由加拿大哥伦比亚大学公布)中筛选出10条带谱清晰、多态性高、稳定性好的引物，并对所有菌株基因组DNA进行ISSR．PCR扩增反应，10个引物共获得72个扩增位点，扩增片段大小在150．2000bp之间：其中多态性位点数为46个，多态性百分率达63．9％。对扩增结果进行聚类分

6、析，结果表明：供试的82株菌株之间存在丰富的遗传多态性，其遗传距离在0．561．0．912之间；在阈值为0．606处可以较明显地分为五组。通过对从折多山冬虫夏草人工繁育基地的贡嘎蝙蝠蛾人工繁育基质、工具、室内空气、外界环境和废弃物中分离的粉拟青霉菌与从罹病虫体中分离的粉拟青霉菌进行ISSR分析发现，供试的82株粉拟青霉菌在ISSR聚类分析上表现不同的聚类关系，这说明多年长期集约化人工繁育贡嘎蝙蝠蛾，使得康定折多山冬虫夏草人工繁育基地的粉拟青霉菌存在丰富的遗传多样性，并与西藏林芝、甘肃玛曲、青海拉脊雪山、四川小金等冬虫夏草天然产地进行了充分的病原菌

7、交流，培养基地的所有环境及介质都可成为贡嘎蝙蝠蛾发生拟青霉病的病原来源。试验中采自病虫体的粉拟青霉菌均与采自试验房(8号、9号、10号)、部分中央大厅和楼房南面外墙的菌株具有较高的同源性，这可以推断引起虫体发病的病源具有多元性；中央大厅和试验房(8号、9号、10号)可能是引起虫体发病的主病源，而楼房南面外墙是次病源；进一步说明了折多山冬虫夏草人工繁育基地半人工繁育贡嘎蝙蝠蛾发生拟青霉病的病菌来源的广泛万方数据四川农业大学硕士学位论文性。2．粉拟青霉菌生物学特性差异研究根据遗传差异程度的不同，试验选用菌株2．J4．1、1-WQN．1、2．E2．2、

8、2-M3．1、L．8、1-E10．1、2-G5、1-C6．2(编号依次为：13、20、22、33、54、58、68、82)做生物学特性差