P66shc基因表达与糖尿病视网膜病变的相关性研究.pdf

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1、分类号：密级：公开学号：2015211015单位代码：10759石河子大学硕士学位论文P66shc基因表达与糖尿病视网膜病变的相关性研究学位申请人马朋举指导教师张奕霞教授申请学位门类级别临床医学硕士学科、专业名称眼科学研究方向玻璃体与视网膜疾病所在学院医学院中国·新疆·石河子2018年5月StudyonthecorrelationbetweenP66shcgeneexpressionanddiabeticretinopathyADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInParti

2、alFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByMaPeng-ju（Ophthalmology）Supervisor:ZhangYi-xiaMay,2018石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究

3、生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要目的：利用STZ诱导的糖尿病大鼠模型,观察视网膜组织中P66shc的表达变化,并探讨与视网膜组织发生损伤的关系。方法：本实验分实验组和正常对照组,每组

4、10只SD大鼠,体重160-200克。采用一次性腹腔注射STZ30mg/Kg的方法建立SD大鼠糖尿病模型(对照组注射等量PBS)。实验前检查空腹血糖≥16.7mmol/L入选为实验组。两组分别于造模2月和3月时各取5只大鼠，将其处死，取视网膜组织。采用投射电镜观察鼠视网膜组织超微结构变化，免疫荧光法检测鼠视网膜组织p66shc的定位及表达变化；蛋白质免疫印迹（WesternBlot，WB），检测鼠视网膜组织中p66shc蛋白的含量；RT-PCR技术检测鼠视网膜p66shcmRNA表达变化。结果：SD大鼠腹腔注射STZ后7

5、2小时,大鼠空腹血糖≥16.7mmol/L，表明糖尿病大鼠造模成功。实验组大鼠血糖升高明显，出现明显多饮、多食、多尿等症状，且与对照组相比，体重明显较轻。2月及3月时分别处死大鼠，行视网膜组织相关检测，电镜检查显示：正常组大鼠视网膜结构清晰，视杆视锥细胞排列整齐，胞浆可见大量内质网和线粒体，神经节细胞和大小不等，分布均匀，细胞器结果正常，各结构形态正常分布均匀。糖尿病对照组毛细血管内皮细胞水肿,线粒体肿胀。视细胞外节膜盘间隙扩大,排列紊乱。内节线粒体水肿,排列不规则，细胞出现空泡化，核周间隙增大，排列紊乱，细胞固缩坏死排

6、列松散，3个月较2个月病变程度更大。免疫荧光法显示实验组和对照组视网膜结构都有一定量p66shc表达，荧光强度从脉络膜向玻璃体腔方向表达增加，荧光主要沉积于视网膜神经上皮层中的内核层和神经节细胞层，提示P66shc主要定位于这两层。实验组红色荧光于2月及3月时均要明显高于对照组，3月时更明显，半定量结果提示：糖尿病组大鼠视网膜组织中p66shc与正常组相比表达是有变化的，呈明显增强趋势，差异存在统计学意义，（2月组P＜0.05，3月组P＜0.01）。RT-PCR结果显示实验组大鼠视网膜组织p66shcmRNA的表达于2月

7、及3月时均显著升高，3月时更明显,与对照组比较有显著差异，差异有统计学意义（分别为P＜0.05，P＜0.01）。WesternBlot结果分析：实验组大鼠视网膜组织p66shc蛋白的表达明显升高,与对照组比较2月及3月时均有显著差异，3月组更明显，差异有统计学意义（分别为P＜0.05，P＜0.01）。结论：糖尿病视网膜病变大鼠视网膜组织p66shc表达显著增加，提示其可能在糖尿病视网膜病变的产生过程中起重要作用。关键词：糖尿病性视网膜病变；p66shc；氧化应激IAbstractObjective:Toobserveth

8、echangesintheexpressionofP66shcinretinaltissuebyusingSTZinduceddiabeticratmodel,andtoexploretherelationshipbetweenretinaltissueinjuryandretinaltissueinjury.Met