金线莲多糖提取物对nafld调脂保肝作用及机制研究

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：__________UDC：___________金线莲多糖提取物对NAFLD调脂保肝作用及机制研究姓名：王秋新学号：2111548087院系：中药学院学位类型：专业学位专业：中药学研究方向：中药药效评价与临床应用研究导师：唐春萍教授论文提交日期：2018年5月16日论文答辩日期：2018年5月18日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广东药科大学硕士研究生学位论文StudyonthehepatoprotectiveeffectandmechanismofpolysaccharidesfromAnoecto

2、chilusroxburghii（ARP）onNon-alcoholicfattyliverdisease（NAFLD）Candidate：WangQiu-xinStudentID：2111548087Affiliation：SchoolofChineseMateriaMedicaAcademicDegreeApliedfor：ProfessionaldegreeofacademicSpeciality：ChineseMateriaMedicaSupervisor：Prof.TangChun-pingAssistantSupervisor：Prof.WuZhi-nanDayo

3、fDefence：May2018Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversity52018广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学硕士研究生学位论文金线莲多糖提取物对NAFLD调脂保肝作用及机制研究摘要目的：通过观察金线莲多糖提取物（Anoectochilusroxburghiipolysaccharides，ARP）对LO2细胞脂肪变性模型和非酒精性脂肪肝病（NAFLD）动物模型的影响，探讨ARP对NAFLD的调脂保肝作用及其可能的作用机制，以期为该药的进一步开发研究和临床应用提供科学依据。方法

4、：用含50%胎牛血清的DMEM培养液诱导人肝LO2细胞，以建立肝细胞脂肪变性模型，油红O染色，倒置显微镜观察肝细胞中脂滴积聚情况并检测细胞内甘油三酯（TG）水平。检测ARP对LO2细胞的细胞毒作用，然后设正常组，模型组，ARP高、中、低剂组。药物作用24h后，检测肝细胞内TG，细胞培养上清液肝酶（ALT、AST）及细胞氧化应激相关指标，包括超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）。取48只雌性SPF级（Sprague-Dawlay，SD）大鼠，按体质量随机分为正常组，模型组，辛伐他汀组（8mg/kg），ARP高、中、低剂量组（238、11

5、9、59.5mg/kg）。早上正常组给予普通饲料喂养及等体积生理盐水灌胃，其余各组均以1mL/100g灌服高脂乳剂复制大鼠NAFLD模型，下午正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃，药物组分别给予辛伐他汀及ARP高、中、低剂量灌胃，连续给药8周。实验期间每天记录大鼠的生长状况，每周定期称重。实验结束末，取血并及时摘除肝脏称取肝湿重。肉眼观察各组大鼠肝脏形态变化，光镜下观察病理形态变化并评分；测定各组血脂，血糖，肝功能，肝脂，超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA）的含量；逆转录-聚合酶链反应法（ReverseTranscription-PolymeraseChainReact

6、ion，RT-PCR）检测CYP2E1基因的表达。I广东药科大学硕士研究生学位论文结果：第一部分ARP对肝细胞脂肪变性模型的研究50%胎牛血清诱导LO2细胞24h后，油红O染色可见细胞内有大小不等的橘红色脂滴存在，与正常组比较，模型组细胞内TG含量显著增加（P<0.01），表明NAFLD脂肪变性体外模型成功复制。ARP可改善脂肪变性LO2细胞内的脂质沉积、显著降低细胞内TG含量（P<0.01），显著降低细胞上清液ALT、AST含量（P<0.01），显著升高细胞内SOD、GSH-Px（P<0.01）活性。第二部分ARP对NAFLD大鼠实验研究与正常组比较，模型组血清TG、TC、

7、LDL-C、FFA、FBG、ALT、AST水平显著升高（P<0.05或0.01），血清HDL-C明显降低（P<0.05），肝指数及肝TC、TG、MDA含量均显著升高（P<0.01），肝SOD活性明显下降（P<0.01），NAFLD活动度积分（NAS）明显升高（P<0.01），肝CYP2E1表达量明显增加（P<0.01），肝脏病理切片显示模型组肝小叶界限模糊，肝索排列紊乱，肝细胞明显增大、呈肿胀态，并可见大泡样脂肪变性。与模型组比较，ARP可显著降低血清TG、TC、LDL-C、FFA水平（P<0.05或0