消退素d1对a549细胞株钠离子通道蛋白的影响

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1、论文题目：消退素D1对A549细胞株钠离子通道蛋白的影响论文评阅人：答辩委员会主席：严敏教授浙江大学附属第二医院答辩委员会成员：王均炉塾授温州医学院附属第一医院李至塾授温州医学院附属第二医院一、缩略词袁⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4二、摘要1．中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52．英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7三、论文正文1．前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11(1)脂多糖引起的急性肺损伤模型的建立(2)消退素D

2、1对A549细胞株钠离子通道蛋白的影响3．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯··194．分析和讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯235．全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯266．参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30六、综述1．综述正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯312．参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36七、独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯383缩略词表(按字母顺序)缩写词英文全称中文全称ALIAcutelunginjury急性肺损伤ARDSATIIBSADABENaCFBSH202IHCLPSmRNAPBSPDsR．vDsTBSTBSTAcuterespiratorydistresssyndromeAlveolartypeIIcells急性呼吸窘迫综合症肺泡II型上皮细胞Dilutedalbuminstandards稀释的白蛋白标准品Diaminobezidine二氨基联苯胺EpithelialNa+channel上皮钠离子通道fetalbovi

4、neserumhydrogenperoxide胎牛血清过氧化氢Immunohistochemistry免疫组织化学Lipopolysaccharide脂多糖MessageRNA信使RNAPhosphatebufferedsaline磷酸缓冲生理盐水ProtectinsResolvins保护素消退素TrisbuffersaltsolutionTris缓冲盐溶液Trisbuffersaltsolution+Tris缓冲盐溶液+TweenTween20WBWesternblot免疫蛋白印迹4论文题目：消退素D1对A549细胞株钠离

5、子通道蛋白的影响中文摘要目的：急性肺损伤(ALl)是一种可危及生命的以肺泡上皮损伤为特征的临床综合症，最终发展为肺水肿。目前ALI／ARDS的发病机制尚未完全阐明。以前人们认为，肺水清除的主要动力是钠离子跨上皮转运。上皮钠离子通道(ENaC)的表达和活性降低被认为与肺水肿进展有关。现今的研究发现在肾和肺缺血再灌注损伤模型中，消退素D1(RvDl)已表现出有效的抗炎和促消退作用。但是消退素D1对肺水肿的影响缺乏研究。为此，本研究选择A549细胞株建立脂多糖(LPS)引起的急性肺损伤模型，并探讨消退素D1(RvDl)对脂多糖攻击

6、A549细胞株钠离子通道Q，Y亚基的影响。方法：1．分别用O．5lag／ml、1lag／ml、2ug／ml、5ug／ml的脂多糖(LPS)刺激A549细胞株，并利用免疫蛋白印迹法(Westernblot)检测在刺激12h后A549细胞株上Q．ENaC和Y．ENaC的蛋白表达；用lu∥ml的脂多糖(LPS)刺激A549细胞株，并利用免疫蛋白印迹法检测在刺激6h、12h、24h、48h后A549细胞株上Q．ENaC和Y．ENaC的蛋白表达，从而摸索出内毒素性肺损伤细胞模型中最适的脂多糖浓度和刺激时间。2．将细胞随机分为三组：①组

7、为空白组：无血清的培养基不含任何药物；②LPS组：无血清的培养基中加入1u∥mlLPS；⑨组为LPS+RvDl组：无血清培养基中加入lpg／mlLPS+l×10lmol／mlIhDl。3．药物刺激12h后用免疫蛋白印迹法和免疫组织化学方法(IHC)分别检测A549细胞株上a．ENaC和y．ENaC的蛋白表达。试验重复3次。5．所有数据以均数±标准差(文±S)表示，GraphPadPrism5软件进行分析处理，所有数据用单因素方差分析(one-wayANOVA)和Student—Newman—Keulsposthoc检验进行组

8、间比较。P<0．05为差异有统计学意义。结果：1．脂多糖引起的急性肺损伤模型的建立免疫蛋白印迹检测结果显示：0．5lag／ml，1ug／ml，2ug／ml和5lag／mlLPS作用A549细胞12h后，低剂量组(无血清培养液中加入1ug／mlLPS)的Ⅱ．ENaC和y．ENaC蛋白表达与空