柴胡皂苷a对难治性癫痫大鼠痫性发作及p-gp表达影响

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1、l嬲炒掣燃硕士学位论文柴胡皂苷a对难治性癫痫大鼠痫性发作及P．GP表达的影响硕士研究生：孟春想指导教授：谢炜摘要背景癫痫是一组由不同病因所引起，脑部神经元高度同步化，且常具自限性的异常放电所导致，以发作性、短暂性、重复性及通常为刻板性的中枢神经系统功能失常为特征的综合征。发作性指癫痫突然发生，持续一段时间后迅速恢复，间歇期正常；短暂性指患者发作持续的时间都非常短，数秒钟、数分钟或数十分钟，处癫痫持续状态外，很少超过半小时；重复性指癫痫都有反复发作的特征，仅发作一次不能诊断为癫痫；刻板性指每种类型发作的临床表现几乎一致。由于其临床发作具有发作性、短暂性、重复性的特点，长期反复

2、发作可致智能低下、精神迟滞、甚则痴呆。癫痫的患病率各国和地区不一。1997年WHO统计报告显示，癫痫的患病率在发达国家、经济转轨国家、发展中国家和不发达国家分别为5．0‰、6．1‰、7．2‰、11．2％0，估计全球有约5000万癫痫患者。亚洲国家的患病率在一般在5‰一10‰之间，我国癫痫患病率为7‰，现有癫痫患者900多万人，活动性癫痫(即一年内癫痫发作次数在2次以上者)的患病率为4．6‰，活动性癫痫患者600多万人，同时，我国每年的新发病率25／10万，年新增发患者数为35万人。国内文献报道多数癫痫病人未能得到正规治疗，治疗缺口在34．8％75％不等，癫痫死亡率为2．42

3、／10—7．82／10万，但真正因癫痫死亡(死于癫痫持续状态)的只占所有死因20％，有40．21％因意外事件死亡，死于自杀者5．5l％，不明原因死亡为4．13％。大约70％80％的患者在医师指导下经正规服用抗癫痫药物(AEDs)和科学摘要规范治疗后可从事正常工作、学习或生活，其中约30％的癫痫患者，临床上常用的抗癫痫药物很难控制其发作，被称为难治性癫痫(Refractoryepilepsy，RE)。目前国际上对难治性癫痫尚缺乏统一准确的定义，临床上将经过合理使用多种抗癫痫药物，血药浓度已达到最大耐受剂量，但癫痫发作仍不能得到有效控制者称为难治性癫痫。国内学者提出了较为全面的

4、定义：频繁的癫痫发作，至少每月4次以上；一线抗癫痫药物正规治疗且药物的血药浓度达到有效范围，至少观察2年，仍不能控制发作，影响日常生活：无进行性中枢神经系统疾病或占位性病变。由于难治性癫痫发作频繁，严重影响患者的学习、工作和生活，甚至严重致残，因此研究难治性癫痫发病机制及寻找有效的治疗方法十分重要。与普通癫痫一样，难治性癫痫的发病机制仍不明确，近年来研究发现难治性癫痫患者脑内存在多药转运体的高表达，可能参了难治性癫痫的耐药，研究最深入的是P糖蛋白(P．GP)。这种蛋白是一种膜结合蛋白，属于转运蛋白ArP结合物超家族的成员之一，MDRl(multidrugresistance

5、1)基因编码，存在于正常人类和哺乳动物有分泌功能的组织和屏障结构中，具有广泛的底物特异性，能与多种结构不同的被动扩散入细胞内的药物和有毒性物质结合，依靠ATP的转化能量将到达细胞内的药物和细胞毒性物质泵出，使P．GP在保护正常组织不受毒素损害的同时，将作用于靶点的药物浓度降低，从而产生耐药性。P．GP抑制剂能显著提高脑内抗癫痫药物浓度，迄今为止已发现数百种MDR逆转剂，这些逆转剂主要可分为7大类：钙通道阻滞剂、环孢霉素类、激素及抗激素类化合物、蛋白激酶抑制剂、钙调素拮抗剂、异喹啉类生物碱及其他等。上述药物均能不同程度的下调P．GP的表达，但由于明显的神经毒性作用，至今尚未批

6、准在人体使用上述药物。因此，如何选择药物是研制耐药蛋白抑制剂作为抗癫痫药物的重点。癫痫属于中医“痫病"范畴，癫痫在理论上从肝论治，《内经》早有记载。癫痫的病机与肝的疏泄失常有关，风痰瘀为肝失疏泄的病理变化。临床研究表明，癫痫从肝论治并运用柴胡疏肝汤治疗难治性癫痫，取得了较好疗效。在此基础逐步筛选出君药柴胡的有效成分柴胡皂苷a(SSa)，本课题组Ⅱ硕士学位论文前期研究发现SSa具有抑制戊四氮致痫大鼠痫性发作的作用。临床实践中中医药治疗难治性癫痫具有一定的优势，并且发现中药能够增强难治性癫痫对抗癫痫药物的敏感性，降低抗癫痫药物的用量。是否SSa对P．GP及MDRl的表达有一定的

7、抑制作用?是否可以作P糖蛋白的一种阻断剂?本研究以难治性癫痫大鼠模型作为中医药治疗癫痫临床研究的突破口，以多药耐药作为切入点，探讨SSa干预作用的可能机制。目的本研究拟建立锂．匹罗卡品难治性癫痫大鼠模型，观察SSa对癫痫大鼠痫性发，●，作及脑电图痫性波的影响，评价SSa对P．GP及MDRlmRNA表达的影响，探讨SSa在“从肝论治”难治性癫痫中的作用机制，为癫痫的治疗提供实验依据。方法1．氯化锂．盐酸匹罗卡品难治性癫痫模型的建立采用氯化锂．盐酸匹罗卡品的化学点燃方法制作模型。具体如下：SD大鼠首日腹腔注射氯化锂(1