广西鸭圆环病毒遗传变异分析及cap蛋白的原核表达

《广西鸭圆环病毒遗传变异分析及cap蛋白的原核表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号S墨55：3UDC硕士学位论文密级广西鸭圆环病毒遗传变异分析及Cap蛋白的原核表达粟艳琼学科专业亟随盖医堂指导教师塞垡椹盟究员论文答辩日期2Q!圣生§旦2墨旦学位授予日期——答辩委员会主席睦左童巫究员广西大学学位论文原创性和使用授权声明。f煳嬲本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除己特另IJJjN以标注和致谢的地方外，论文不包．含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位

2、论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：口保密，在年解密后适用授权。b不保密。(请在以上相应方框内打“√”)篙主鞴论文作者签名：纠“＼二指导教师签名：参。＼1∥刀作者躲幅Ⅲ玷好尹日期：≯肜．“罗日期莎口肛．莎’／歹电子邮箱：勺2川／对汐形善，么刎广西鸭圆环病毒遗传变异分析及Cap蛋白的原核表达摘要鸭圆环病毒(Duck

3、circovirus，DuCV)主要是侵害宿主的免疫系统，而导致宿主免疫力低下，进而引发二重或多重感染，可给养殖业造成极大经济损失。然而由于DuCV发现较晚，又缺乏体外培养DuCV的方法，因此对其致病机理及危害的研究尚存在很多困难。为了解DuCV在广西鸭群中流行和变异，以及危害程度，明确广西DuCV的基因型及优势基因型，并为创建研制DuCV抗体快速检测方法奠定基础。本研究拟从广西DuCV遗传变异分析及Cap蛋白的原核表达两个部分对广西DuCV进行研究和分析。1、广西DuCV遗传变异分析本研究采取PCR扩增方法对2010--一2012年间广西9市鸭群中2569份内脏组织样品进行

4、了检测，检测出阳性样品194份，阳性率为7．55％。其中，筛选部分阳性样品进行基因组扩增和比对分析，共获得14个DuCV全基因组序列。基因组大小为1993nt-～1995nt，与已报道的其他DuCV毒株基因组大小一致。14个DuCV广西毒株彼此之间的同源性为93．5％～99．8％，与德国、美国、韩国分离株以及24个中国大陆毒株的同源性为T92．2％----99．6％，而与另外18个大陆地区毒株和4个台湾毒株同源性仅为82．3％～86．2％。DuCV基因组内包含3个主要的开放阅读框(Openreadingframe，ORF)：ORFV1／rep、ORFC1／cap和ORFC2，

5、所有14个广西毒株在上述编码区没有核苷酸插入或者缺失现象。这14个广西毒株Cap基因(ORFC1)长度均为774nt，编码257个氨基酸。核苷酸序列同源性为89．5％～99．9％，氨基酸序列同源性为95．3％"-'100．O％。ORFC2长度均为237nt，编码78个氨基酸。核苷酸序列同源性为96．6％---．100．O％，氨基酸序列同源性为91．1％'-一100．O％。Rep基因(ORFV1)长度均为879nt，编码292个氨基酸。核苷酸序列同源性为95．9％～99．7％，氨基酸序列同源性为98．3％～100．0％。基于DuCV基因组遗传进化树分析显示存在两个明显的分支即：

6、基因1型与基因2型。基因1型存在三个亚型即：基因1．1亚型、基因1．2亚型和基因1．3亚型。其中基因1．1亚型主要包括22个中国大陆毒株及一个德国毒株，基因1．2亚型则包括14个中国大陆毒株、一个美国毒株33753．52和4个韩国毒株，基因1．3亚型包括两个中国大陆的毒株LJ07和LJ33。而基因2型也存在三个亚型即：基因2．1亚型、基因2．2亚型及基因2．3亚型。其中基因2．1亚型包括中国台湾的四个毒株，基因2．2亚型为15个中国大陆毒株，基因2．3亚型为三个中国大陆毒株MH02．07、MHl1、HZ09。本研究所获得的14个广西毒株均属于基因1型，其中Qz37-2012、

7、Qz04-2011、LZl1-09、FC35—2012、Qz36-2012、TD41—09、FC33．2012、FC34—2012、FC32—2012、NNl3．2012归属于基因1．1亚型，LZ01．2011、NNll-2012、NNl2—2012、PX08．2011归属于基因1．2亚型。DuCVCap蛋白的原核表达使用GeneDesigner2．0软件(DNA2．0inc公司)对Cap基因进行分析和密码子优化，并在首尾分别加入BamI-II和SalI位点，且去除基因内部其余常见酶切位点。经BamHI