基于itraq定量蛋白质组学技术筛选结直肠癌相关糖蛋白

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1、中图分类号R574．6UDC61O硕士学位论文学校代码密级10533基于iTRAQ定量蛋白质组学技术筛选结直肠癌相关糖蛋白iTRAQ-．basedProteomicstoScreenoutColorectalCancerassociatedGlycoproteins作者姓名：张瑜学科专业：临床医学研究方向：内科学学院(系、所)：湘雅二医院指导教师：汪春莲教授副指导教师：刘小伟副教授论文答辩日期逻!；：』：幽答辩委员会主席中南大学二。一三年五月硕士学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及

2、取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。储繇茹珥嗍丛年』月业日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所

3、将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者虢蚪导师签名丝日期．皿年L月丝日本课题受国家自然科学基金课题“肿瘤相关糖类抗原Tn与结直肠癌发病机理的关系研究"(No．8172299)资助硕士学位论文基于iTRAQ定量蛋白质组学技术筛选结直肠癌相关糖蛋白摘要目的：本研究通过定量蛋白质组学方法比较远癌正常组织、不同肿瘤相关糖类抗原(Tn)表达的结直肠癌组织的差异表达糖蛋白，以期筛选到与结直肠癌发生发展相关的糖蛋白，为迸一步研究与Tn抗原相关0型糖蛋白在结直肠癌发生发展过程中的作用打下基础，

4、并为结直肠癌的诊断、预后监测和防治提供新的靶标。方法：收集2011年11月到2012年4月9例中南大学湘雅二医院病理确诊结直肠癌患者术后新鲜结直肠癌组织和距癌旁5．10cm以外的正常结直肠肠粘膜组织，根据Tn染色结果分为Tn阳性结直肠癌组(Tn+组)、Tn阴性结直肠癌组(Tn．组)和正常结直肠粘膜组织组(正常组)，按分组选取部分组织分别提取组织总蛋白，采用相对和绝对定量同位素标记(isobarictagsforrelativeandabsolutequantitation，iTRAQ)联合二维液相色谱串联质谱(2DLC—M

5、S／MS)的定量蛋白质组学技术对各组总蛋白进行差异蛋白质组学分析，所得差异蛋白及肽段信息经ProteinPilot软件进行分析，运用Uniprot、DAVID数据库对差异蛋白质分类进行分析，得出差异表达的糖蛋白和O型糖蛋白；再根据String、GO、KEGG数据库对糖蛋白相互关系及O型糖蛋白相互关系和功能聚类、代谢途径分类进行分析；根据初步分析结果，从差异表达O型糖蛋白中选取核心蛋白多糖(Decorin，DCN)和含山梨醇和SH3结构域蛋白1(SorbinandSH3domain-containing硕士学位论文中文摘要p

6、roteinl，SORBSl)分别进行组织和细胞表达水平的蛋白质免疫印迹(WesternBlot，WB)验证。结果：l、iTRAQ标记的2DLC．MS／MS结果：共有1051种非冗余差异蛋白被鉴定，其中有定量信息，且≥2条匹配肽段在95％置信区间内的蛋白质有750种；Tn．组与正常组之间存在差异的蛋白有330种，Tn+组与正常组之间存在差异的蛋白有317种，Tn．组与Tn组+之间存在差异的蛋白有316种；Tn．组与Tn+组之间的差异蛋白质中，糖蛋白共55种，O型糖蛋白19种，19种O型糖蛋白中，其中12种在Tn．、Tn+、

7、正常组，两两之间均存在差异。2、差异蛋白质相互作用分析：55种糖蛋白中，K8和K18独立1个相互作用网，35种蛋白形成1个相互作用网，占所有蛋白质的63．64％，余18种蛋白不在相互作用网内；而在19种O型糖蛋白中，K8和K18仍然是独立的1个关系作用网，10种蛋白质处于同一个关系作用网中，占所有蛋白质的52．63％，余7种蛋白不属于任何相互作用网。3、差异0型糖蛋白GO功能聚类及KEGG代谢途径分类：(1)生物进程功能注释分类，发现19种O型糖蛋白主要参与了代谢过程、调节生物过程、细胞代谢过程等10种生物进程，其中参与代

8、谢过程的差异蛋白12种，占63．12％，参与调节生物进程的差异蛋白质10种，占52．63％；(2)分子功能注释分类，发现这些差异O型糖蛋白参与结合、结构分子活动、催化活性、酶调节活性、抗氧化活性、转IV硕士学位论文中文摘要运活动6种分子功能，其中参与结合功能的差异O型糖蛋白占68．42％；(3)细胞组成