抑制sos应答系统对大肠杆菌抗药性的影响

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1、万方数据TheInfluenceofantibiotic--resistanceonEscherichiacolibyinhibitingSOSresponsesystemThq"submittedt01laeSlSsubmlttetoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyNiu、№iwei(DepartmentofAnimalScienceandVeterinary)Supervisor：Prof．Huan

2、gJuanLiuYuqingShanHuQingdao．China万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅

3、和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)时间：沙瞬多月可日帆训年厶夕卫捕Ⅵ彬绷签欧鲻潞划隧确狮万方数据抑制SOS应答系统对大肠杆菌抗药性的影响摘要SOS应答是细菌应对药物压力的重要机制之一，在细菌的抗药性突变中发挥着重要的作用。SOS应答为我们提供了克服细菌抗药性的新思路，·即通过阻断SOS应答，增强抗生素杀菌效力，抑制细茵抗药性的产生。RecA．LexA是SOS应答重要的双向调控系统，本文通过构建过表达SO

4、S应答阻遏蛋白LexA菌株BL21．LexA、敲除SOS应答启动蛋白RecA菌株25922／ArecA研究抑制SOS应答对大肠杆菌抗药性的影响。构建过表达SOS应答阻遏蛋白LexA菌株BL21．LexA，经IPTG诱导后，SDS．PAGE和Westernblot鉴定LexA表达；通过绘制生长曲线，发现重组质粒的转化并未对重组茵造成明显生理生长的影响；实时荧光定量PCR检测SOS应答相关基因表达量变化，发现在恩诺沙星药物压力下，过表达LexA菌株的SOS被抑制；利用梯度平板法测定过表达菌株BL21．LexA对恩诺沙星杀菌力和抗药性的影响，结果显示

5、，过表达菌株对恩诺沙星杀菌力增强而抗药性突变率降低；建立小鼠腿部感染模型，在小鼠体内过表达菌株BL21．LexA未产生抗药性，而对照组分离抗性菌株数量与时间正相关。以上试验结果表明，过表达SOS应答阻遏蛋白LexA可以抑制SOS应答系统的启动，增强恩诺沙星的杀菌效力，并降低对其的抗药性。利用Red同源重组技术将EcoliATCC25922的recA基因敲除，构建recA基因缺失菌株25922／ArecA，以标准菌株EcoliATCC25922为对照，研究recA基因敲除后杀菌效力及抗药性的变化。以微量肉汤稀释法测定菌株对恩诺沙星的MIC值，敲除

6、recA基因显著提高菌株对药物的敏感性；在药物压力下，敲除recA后，抗药性突变率显著下降100倍；时间．杀菌曲线、浓度．杀菌曲线以及E．Test试验的结果再次表明敲除recA抑制SOS应答后，细菌对药物的敏感性显著提高。本研究通过两种方法抑制大肠杆菌SOS应答的启动，研究抑制SOS应答系统对细菌抗药性的影响，结果表明，抑制大肠杆菌SOS应答系统，可以显著提高其对恩诺沙星的敏感性，降低抗药性突变率，表明SOS应答对细菌抗药性突变具有重要作用，提示我们以SOS应答网络为靶点研制新药可有效减少细菌抗药性发生。关键词：大肠杆菌；抗药性；SOS应答；过

7、表达；基因敲除万方数据TheInfluenceofantibiotic．．resistanceonEscherichiacolibyinhibitingSOSresponsesystemAbstractSOSresponseisallimportantmechanismofbacterialresponsetothedrugpressure，whichplaysallimportantroleonbacterialresistancemutations．TheSOSresponseprovidesUSanewideatoovercomebact

8、erialresistance，thatis，blockingtheSOSresponseCanenhancethebactericidaleffec