sos1 rnai对盐芥耐盐性的影响

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1、山东师范大学硕士学位论文SOS1RNAi对盐芥耐盐性的影响姓名：马文英申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：张慧;赵彦修20060420独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得(注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空)或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：

2、约a块导师签字^’*学位论文版权使用授权书彳易钐本学位论文作者完全了解』墩有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权—堂撞可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：弓壶集导师签字签字日期：矽f年6月7日签字日期：纫6年‘月7日山东师范大学硕士学位论文SOSlI矾m对盐芥耐盐性的影响马文英(山东师范大学生命科学学院

3、，济南，250014)中文摘要盐胁迫下，植物细胞的离子均衡受到破坏，胞质中积累过多的Na+，对植物细胞的代谢产生毒害。植物细胞为适应胁迫环境，一方面积累可溶性有机物质；另一方面，则通过Na+外排或者区隔化、并调整K+肘a+比率的机制来消除Na+的毒害。拟南芥细胞内控制Na+Pbjj}的基因SOSl及离子区隔化基因AtNHXl均己克隆，SOSl及AtNHXl在拟南芥中的过量表达显著提高了转基因植株的耐盐性。在拟南芥中，SOSl及SOS2、SOS3所组成的SOS信号通路的调控机制业已得到阐明，研究表明SOS

4、信号通路在调控离子均衡和植物耐盐性中发挥重要作用。作为拟南芥近缘的盐生植物盐芥，短时间内能耐受高达500mMNaCl的冲击，在盐适应前后既不产生盐腺也没有复杂的形态上的变化，表明其耐盐性很大程度上源于基本的生理和生化机制。因此在盐芥中沉默SOSl基因进行研究，对揭示盐生植物耐盐性的基础具有重要意义。本实验将盐芥编码N删逆向转运蛋白的SOSl基因721bp的片断反向重复构建到基因沉默载体pGSAl252中，导入农杆菌后，进行植物遗传转化，实现盐芥中SOSl的转录水平的下降。在用浓度为50ppm的Glufo

5、sinateammonium筛选后，获得转基因株系，自交一代获得足够的转基因种子后，对其进行了分子生物学的验证及生理指标的检验。转基因植株的分子生物学检测如下：1．各转基因株系中，均能通过PCR扩增出Bar基因的500bp的特异性条带，表明’卜DNA已经携带Bar基因及SOSl基因片断整合进盐芥基因组中。2．RealtimePCR结果显示，转基因株系在NaCl处理条件下SOSl转录水平会发生不同程度的下降。进一步说明SOSI基因的反向重复片段整合到拟南芥的基因组后已正常转录，并引起了SOSIRNA的降解

6、。耐盐生理指标分析表明：1．在含不同浓度NaCl(O一300mmol／L)的培养基上，SOSl基因的沉默降低了转基因盐芥的耐盐性。2．通过比较各个转基因株系之间耐盐性的差异及SOSl转录的水平，发现SOSl转录水平降低越多，盐芥的耐盐性越差。山东师范大学硕士学位论文3．在用不同浓度的NaCI(0—400retool／L)处理后，结果表明转基因植株长势明显差于对照。4．Na+、K+含量测定表明，0，200mmol／LNaCl处理下转基因根和地上部分Na+的积累显著高于对照，300，400mmol／LLNa

7、Cl处理下则差异不是很明显。0-400mmol／LNaCl处理后，转基因植株和对照中，根和地上部分K+含量均下降，但差异不明显。5．在盐胁迫下，对MDA含量的测定表明，野生型植株及转基因植株MDA含量都增加，转基因植株明显高于对照。以上结果表明，盐渍生境下，利用Na+外排的策略，降低Na十含量，使植物免受过多的伤害，是盐芥耐盐机制的重要组成部分。SOSl的基因沉默降低了盐芥的耐盐性。关键词：SOSl基因Nd／I-I+逆向转运蛋白盐芥基因沉默植物耐盐性分类号：Q782山东师范大学硕士学位论文Effecto

8、fSOSlRNAionThellungiellahalophilaMaWenying(SchoolofLifeScience，ShandongNormalUniyersity，Jinan250014)AbstractSoilsalinityisODeofthemostsignificantabioticstressesforcropplantsinagriculturalfieldsworldwide．Highlevelsofsodiumi