培养条件对大肠杆菌的影响

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1、山东职业学院毕业论文题目：浅析培养条件对大肠杆菌的生长和rhG-CSF表达的影响系部：生物工程系专业：生物技术及应用班级：生物技术及应用0931班姓名：学号：指导教师：2012年03月30山东职业学院山东职业学院毕业设计（论文）任务书班级学生姓名指导教师设计（论文）题目浅析培养条件对大肠杆菌的生长和和rhG-CSF表达的影响主要研究内容培养条件对大肠杆菌的生长和rhG-CSF表达的影响。主要从温度，PH值，溶解氧，接种量，培养时间，摇床的转速，工程菌生长时间机诱导时间的对照实验，来研究大肠杆菌的生长和表达的条件。根据研究的结论，进一步分析大

2、肠杆菌在生物药品生产中的应用最佳条件。主要技术指标或研究目标借鉴了大量的著名专家的文献，以文献的知识为主线。严格每一步的操作。逐一研究大肠杆菌的生活条件，对照实验结果，得出更严谨的数据。通过试验得到利于大肠杆菌生长的营养环境和rhG-CSF表达的最佳环境条件，用来提高大肠杆菌工程菌生长和目标蛋白表达，进一步的缩短生产周期，降低生产成本，为大肠杆菌表达的目的蛋白大规模生产奠定最坚实的基础。基本要求严格根据实验步骤合理安排实验,每个实验都设立3个对照,使实验结果更具有说服力，真实可行。主要参考资料及文献[1]杨炜，王伟刚，田海英，等．重组大肠杆

3、菌高表达高密度发酵研究[J]．生物技术2006[2]郑大勇，罗荣城．蔡红兵．基因工程抗体anti?HBsAgFab原核表达体系大规模培养条件的实验研究[J]．第一军医大学学报，2004[3]霍向东，石玉瑚．大肠杆菌高密度发酵补料调控策略的研究进展[J]．新疆农业科学。2004[4]张嗣良．发酵过程多水平问题及其生物反应器装置技术研究,基于过程参数相关的发酵过程优化与放大技术[J]．中国工程科学．2001山东职业学院目录1前言-1-1.1简述-1-2材料与方法-2-2.1菌种-2-2.2试剂-2-2.3培养基及组成成分添加-2-2.4培养方法

4、-2-2.4.1摇瓶发酵-3-2.4.2种子罐培养-3-3培养条件对工程菌的生长和RHG-CSF表达的影响-3-3.1培养温度-3-3.2PH值-3-3.3溶解氧-3-3.4接种量-3-3.5培养时间-4-3.6转速-4-3.7工程菌的生长时间及诱导时机-4-4OD值的测定-4-5结果与分析-4-5.1培养温度的测定-4-5.2PH值的测定-4-5.3溶氧量对菌体生长的影响-5-5.4接种量的影响-5-5.5培养时间的测定-5-5.6转速的测定-5-5.7工程菌的生长曲线及诱导时机对工程菌生长和RHG-CSF表达的影响-5-6小结与讨论-5

5、-参考文献-7-谢辞-8-山东职业学院摘要利用大肠杆菌生产药品是一种生物方法：即利用生物工程技术将外源基因转入大肠杆菌中，经过发酵培养使之表达，经过离心收集菌体，再用特定的溶液使菌体破碎后收集目的蛋白，在经过后续的一些处理制成药品。从菌种选择方面进行研究。工业生产用的菌株是在生物工程技术不断筛选后被挑选出的菌株。选取表达量最高的克隆菌作为发酵用菌种，基因工程菌为大肠杆菌DH5α/pBV220。为了提高大肠杆菌工程菌生长和目标蛋白表达，缩短生产周期，降低生产成本，进行了单因子试验。试验分别从培养温度、pH值、溶解氧、接种量、培养时间、转数、诱

6、导时机等方面对rhG-CSF表达的影响进行了逐一研究。通过试验我们得到了大肠杆菌在10L发酵罐培养的最佳营养条件和最佳环境条件。通过试验得出的结果培养大肠杆菌，在不同时间段测其OD600nm值，得出最佳诱导时机。利用得到的结果，结合药品GMP原则，从而得到了大肠杆菌工业化生产工艺，为大肠杆菌表达的目的蛋白大规模生产奠定基础。关键词：大肠杆菌；发酵；目的蛋白山东职业学院1前言1.1简述大肠杆菌(Escherichiacoli，E.coli)为革兰氏阴性短杆菌，又称肠埃希氏菌。大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能

7、运动，无芽孢。主要生活在大肠内。培养基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌，菌落呈深紫色，并有金属光泽，可鉴别大肠杆菌是否存在。在不致病的情况下（正常状况下），可认为是互利共生（一般高中阶段认为是这种关系）；在致病的情况下，可认为是寄生。它的基因组DNA为拟核中的一个环状分子。同时可以有多个环状质粒DNA。大肠杆菌是研究微生物遗传的重要材料。大肠杆菌是细菌，属于原核生物；具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核有拟核；大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。大肠杆菌细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。作为外源基因表达的宿主，大肠杆

8、菌遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，繁殖迅速，大规模发酵经济，倍受遗传工程专家的重视。目前大肠杆菌是应用最广泛，最成功的表达体系，常做高效表达的首选体系，是生物学上重要的