鸦胆子苦醇增强吉西他滨对胰腺癌的抑癌作用的机制研究

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1、温州医科大学硕士学位论文分类号：R6单位代码：10343学号：151001209硕士学位论文论文题目:鸦胆子苦醇增强吉西他滨对胰腺癌的抑癌作用的机制研究研究生姓名：项雨凯学科专业：外科学类型：学术型指导教师：周蒙滔二O一八年五月温州医科大学硕士学位论文论文题目：鸦胆子苦醇增强吉西他滨对胰腺癌的抑癌作用的机制研究答辩委员会主席：叶再元教授（浙江省人民医院）答辩委员会成员：马烽教授（中国医学科学院）张启瑜教授（温州医科大学附属第一医院）张威教授（浙江省人民医院）论文答辩日期：2018年5月27日温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要･

2、･････････････････････････････････････････････1英文摘要･･････････････････････････････････････････････3英汉缩略词････････････････････････････････････････････6正文：鸦胆子苦醇增强吉西他滨对胰腺癌的抑癌作用的机制研究一.前言･･･････････････････････････････････････････7二.材料和方法････････････････････････････････････9

3、三.结果･･････････････････････････････････････････22四.分析与讨论････････････････････････････････････30五.小结･･････････････････････････････････････････32六.参考文献･･････････････････････････････････････33附录･････････････････････････････････････････････････36致谢･････････････････････････

4、････････････････････････37综述及参考文献･･･････････････････････････････････････38学位论文独创性声明･･･････････････････････････････････590温州医科大学硕士学位论文鸦胆子苦醇增强吉西他滨对胰腺癌的抑癌作用的机制研究中文摘要目的：胰腺癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，更是目前预后最差的实体性肿瘤。虽然近年来肿瘤的诊疗技术有了很大进步，然而胰腺癌总的预后仍然没有很大改观。这归因于许多因素，包括胰腺癌对常规化疗治疗方法的耐药。吉西他滨

5、是治疗胰腺癌的标准一线药物，但由于胰腺癌的化疗耐药性，其只对低于20％的患者有较好的治疗效果。因此逆转胰腺癌耐药特性也许会显著改善对胰腺癌的治疗效果。近年来，Nrf2信号通路逐渐被认识到在胰腺癌对吉西他滨化疗耐药中扮演着重要的角色，但是目前临床上仍然缺少针对于Nrf2信号通路的靶向药物。鸦胆子苦醇，一种苦木内酯类化合物，在多种肿瘤中被证实可以通过抑制Nrf2通路减少肿瘤的化疗耐药性。另外，我们在前期研究中已经发现鸦胆子苦醇可以抑制胰腺癌细胞生长并诱导凋亡，但其对胰腺癌中Nrf2信号通路的作用及胰腺癌耐药特性的影响目前还不清楚。本

6、文旨在探讨鸦胆子苦醇对吉西他滨治疗胰腺癌的影响及可能存在的机制。方法：实验分为四部分：（1）针对吉西他滨对胰腺癌细胞Nrf2信号通路的影响的研究。实验分组为对照组和吉西他滨（5μmol/L）处理组。分别用蛋白质免疫印迹和实时荧光定量PCR对胰腺癌细胞中Nrf2及其靶基因NQO1和HO-1的蛋白表达量和mRNA进行定量检测。（2）针对鸦胆子苦醇对胰腺癌细胞Nrf2信号通路及ROS水平的影响的研究。首先用蛋白质免疫印迹研究PATU-8988胰腺癌细胞经0.5μmol/L的鸦胆子苦醇处理一定时间（0、1、2、4、8、16和24小时）后

7、Nrf2蛋白的表达水平。再用其研究胰腺癌细胞经0.1、0.5和1.0μmol/L的鸦胆子苦醇处理8小时后Nrf2及其靶基因NQO1、HO-1、MDR1和MRP5的蛋白表达水平。之后用实时荧光定量PCR研究0.5μmol/L鸦胆子苦醇对胰腺癌细胞内Nrf2靶基因NQO1、HO-1、MRP1、MRP2、MRP3、MRP4和MRP5的mRNA水平的作用。然后用活性氧测定试剂盒研究0.5μmol/L鸦胆子苦醇对胰腺癌细胞内ROS水平的影响。（3）针对鸦胆子苦醇对吉西他滨治疗胰腺癌的影响的体外研究。实验分组为对照组、鸦胆子苦醇处理、吉西他

8、滨处理组和鸦胆子苦醇和吉西他滨联合处理组。分别用蛋白质免疫印迹、实时荧光定量PCR和细胞荧光试验对Nrf2的蛋白表达水平、mRNA水平和细胞核内蛋白表达水平进行定量检测。分别用CCK-8试验、细胞集落形成实验和AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细