pcr-dgge方法分析内蒙古不同地区青贮玉米中乳酸菌群多样性

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1、动物营养学报!""#!!$"%#$#&'(#)$!"#$%&%'()*$+,(-.$#/+,0)1*#1#($!"#!$%&'()("*&#++,&$%%)-.)/0&.%%(&%)&%.)!"#$%&&'方法分析内蒙古不同地区青贮玉米中乳酸菌群多样性韩吉雨$$!$$$$"!侯先志!杨!凯!赵子夫!郭天龙!王!丽!王海荣"$*内蒙古农业大学动物科学与医学学院!呼和浩特"$""$)%!*北京农学院农业应用新技术北京重点实验室!北京$"!!"%#摘!要!本文旨在研究内蒙古不同地区青贮玉米中乳酸菌菌群结

2、构的变化&试验采用氯化苄方法提取青贮玉米中微生物基因组+,-!以.!/和.01为引物!对扩增的目的片段!利用变性梯度凝胶电泳".23(+445#法研究不同地区青贮玉米中乳酸菌菌群结构&结果表明$0个地区#个牧场的青贮玉米中乳酸菌+445图谱相似性较高!大多数序列代表乳酸菌",+21#2+2#34+21%*#+!6-7#类细菌!并以'(5+21(4+2#,,)&类最多%窖藏半年以上的青贮玉米中仍能发现5+21(2(22)&(6%#&&%,,+(5%)2($(&1(20个球菌属菌存在&另外!$"号条带

3、与'(.2%1(4+21%*相似性达#'8!'号条带与'(5+21(4+2#,,)&相似性达#08!但仍不能鉴定到属的水平!这!株菌属于未培养的或者说是未经测序的菌株&关键词!变性梯度凝胶电泳%青贮玉米%不同地区%多样性!!青贮饲料作为家畜的常规饲料!其研究一直备变化的情况!得出不同碳水化合物比例条件下!青贮*'+受人们的关注!尤其是对其发酵品质有重要影响的中乳酸菌种类不同&马俊孝利用.23(+445在微生物体系!更是研究者关注的焦点&以往研究者青贮中发现了植物乳杆菌"5+21(4+2#,,)&;

4、,+$1+9主要通过传统的培养方式对青贮微生物进行研究&*O+*)/#和乳链球菌"<1*%;1(2(22)&,+21#&#%王小芬但实验室条件下无法完全模拟出青贮的真实环境!则利用.23(+445法研究了复合菌添加剂在整个导致一些微生物很难被培养!甚至缺失!从而迫切需青贮发酵过程中的定殖状况!发现复合系中的主要要一种新的技术手段来研究青贮发酵过程中微生物菌株能稳定定殖并成为优势菌!显著抑制了杂菌的的多样性!并能够对有益菌群的筛选进行指导&繁殖&以上这些研究表明.23(+445方法可以应分子生物学手

5、段的进步!为环境微生物多样性用于青贮发酵体系的多态性研究&的研究提供了新的思路&其中变性梯度凝胶电泳准确地了解青贮微生物区系的变化是判断以及".23(+445#方法因对环境样本反映真实(可靠而改善青贮品质的核心环节!也是有目的调控青贮发*$+酵体系的关键问题&因此本试验利用.23(+445被研究人员广泛采用&付琳琳利用该方法研究了泡菜发酵体系中微生物多样性!发现小片球菌(乳酸方法对不同地区青贮玉米发酵体系微生物的多样性乳球菌(植物乳杆菌和德氏乳杆菌是该体系中主要及菌群结构的变化进行研究!并分析主要

6、菌群!为青的发酵种群%G=H1IJ等*!+对奶酪的制作过程利用贮添加剂菌种的选择提供理论依据&.23(+445进行跟踪!发现5+21(2(2(22)&,+21#&KBLKM7,+21#&菌种在这个过程中一直是主要的菌(!材料与方法群!5+21(4+2#,,)&在成熟期被发现!并在+445图(*(!青贮采样谱中发现了传统培养中未分离的5+21(2(22)&8+*9于!"")年0月分别在呼和浩特"5$$$P')Q!,:#%+%和5+21(2(22)&*+--#$(,+21#&菌株!同时还发现'"P'#

7、Q#(包头"5$"#PO)Q!,'"P0OQ#和赤峰"5$$#P!*0+一些未被命名的菌种%N;?F等利用.23(+445,'!P$%Q#0个城市周边地区的#个牧场"表$#采集研究了不同可溶性碳水化合物水平下!青贮微生物发酵半年以上的全株青贮玉米样品&贮藏形式均为收稿日期!!""#9"'9!!基金项目!内蒙古科技厅草业虚拟研究院"项目编号!""'"%"$#作者简介!韩吉雨"$#)$9#!男!博士研究生!从事饲料微生物研究&5(:;<=$>;?@

8、博士!5(:;<=$E;?F>;<1D?F#&!$%0*CD:!%期韩吉雨等$.23(+445方法分析内蒙古不同地区青贮玉米中乳酸菌群多样性#"!窖贮!且未添加任何添加剂&在牧场进行饲喂时!同次%取上清液加入等体积异丙醇!$,$"体积0:D=,6时进行横切面O点法采样!采集的青贮样品迅速放,;-C"MUO[!#!轻轻混匀!冰水浴!":