抗癌药 nga-dhaq 的趋肝性及其机理研究

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1、第11卷第1期同　位　素Vol.11No.11998年2月JournalofIsotopesFeb.19983抗癌药NGA-DHAQ的趋肝性及其机理研究管昌田　李　林　李云春(华西医科大学附一院,成都610041)陈　文　李铜铃　庞其捷(华西医科大学药学院,成都610041)利用放射性核素示踪法研究抗癌药半乳糖新糖白蛋白2米托蒽醌(NGA2DHAQ)的趋肝性及其机理,探讨其作为受体介导肝靶向抗癌药的可能性。以哺乳动物肝细胞无唾液酸糖蛋白受体的特异性配体NGA为载体,通过丁二酰胺桥与抗癌药DHAQ偶联,制备了肝靶向抗癌药NGA2DHAQ;采99m用Tc标记后

2、,进行家兔和鸡显像、小鼠体内分布实验,并对静注NGA2DHAQ小鼠的血、肝样品进行HPLC检测。核素示踪研究表明,NGA2DHAQ有高度的趋肝性和受体介导结合特性,肝摄取峰值达65%。HPLC检测证实NGA2DHAQ在血中十分稳定,NGA能有效地将其导向肝脏,肝、血药时曲线下面积之比达66149,验证了核素示踪研究的结果。因此,NGA2DHAQ作为受体介导肝靶向抗癌药具有进一步研究的价值。关键词　半乳糖新糖白蛋白2米托蒽醌(NGA2DHAQ)　肝癌　药理学　趋肝性中图法分类号　R97911O6251463目前抗肝癌药物常常由于肝药浓度不高或毒副作用较大而限

3、制了疗效的充分发挥。因此,研制出具有趋肝性的抗癌药物将有助于提高疗效和减少毒副作用。NGA是哺乳动物肝细胞无唾液酸糖蛋白受体(ASGP2R)的特异性配体,能选择性地被肝脏摄取,具有肝靶向药物载体[1,2]的良好特性。DHAQ是一种广谱细胞毒类药物,对乳癌、卵巢癌、非何杰金氏淋巴瘤、头颈[3]部癌和肝癌等都有较好疗效,但由于其具有骨髓抑制、心脏毒性、胃肠道反应和脱发等副作[4]用,使应用受限。本文拟将DHAQ与肝细胞ASGP2R的特异性配体NGA偶联,采用放射性99m核素Tc示踪法研究NGA2DHAQ的趋肝性及其机理,并用HPLC对该结果进行验证,以探讨其作

4、为受体介导肝靶向抗癌药的可能性。3本课题获国家卫生部科研基金资助管昌田:男,60岁,教授,核医学专业收稿日期:1997203212　　修改稿收到日期:199720921214同　位　素　　　　　　　　　　　　　　　　　第11卷　1　实验材料111　主要试剂D2半乳糖(生化试剂,上海试剂二厂),人血清白蛋白(HSA)(成都蜀阳制药厂),Folin酚试剂(华西医科大学基础医学院生化教研室制备),DHAQ(华西医科大学药学院药化教研室制99m备),SephadexG100(Pharmacia公司),Tc淋洗液(由中国核动力研究设计院第一研究所生9999m产的Mo

5、2Tc发生器获得),其余试剂、药品均为化学纯或分析纯。112　主要仪器ShimadzuUV2250分光光度计,HPLC仪(Beckman公司),FJ22008型自动C免疫计数仪(西安262厂),SPECT(Siemens公司)。113　实验动物新西兰大白兔(一级)、昆明纯系小鼠(一级)和公鸡均由华西医科大学实验动物中心提供。2　实验方法211NGA-DHAQ的合成(1)NGA按文献[5]方法制备。产品经SephadexG100柱分离和蒸馏水透析纯化后,分别用苯酚硫酸法和Folin酚法测定其糖和蛋白含量,据此计算糖密度(半乳糖和白蛋白摩尔比),选择足以作为肝

6、靶向药物载体所需糖密度(>20)的NGA供研究用。[6](2)NGA与DHAQ偶联采用丁二酸酐法。即通过一步反应将DHAQ制备成米托蒽醌丁二酸单酯(DHAQ2SA),经甲醇重结晶纯化后,在温和条件下用混合酸酐法将NGA与DHAQ2SA偶联得NGA2DHAQ。NGA2DHAQ中DHAQ含量系将NGA2DHAQ水解后用ShimadzuUV2250分光光度计测定(Kmax=610nm)。212　趋肝性及其机理研究99m99m将NGA2DHAQ用Tc标记后进行家兔和鸡显像实验、小鼠体内分布实验,并与Tc2NGA实验结果比较,以检验NGA2DHAQ的趋肝性和受体介导

7、结合特性;同时对静注NGA2DHAQ小鼠的血、肝样品进行HPLC检测,以验证核素示踪研究的结果。99m21211Tc标记　称取NGA和NGA2DHAQ各10mg,分别用011molöLNaAc溶液(pH=3)0.5mL溶解,加入2göL的SnCl2·2H2O溶液(pH=0)25LL,混匀,最后加入99m-TcO4015mL(含所需活度),充分混匀,4000römin离心,取上清液备用。放化纯度用10%三氯醋酸沉淀法检测。99m99m21212家兔显像　家兔2只,体重210—215kg,分别经耳缘静脉注入Tc2NGA和Tc2NGA2DHAQ约317MBq,立

8、即用Siemens大视野C相机(接MicroDelta计算机)按1