抑制素βa亚基基因对绵羊繁殖性状的功能验证

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1、分类号：密级：学号：2010108003单位代码：10759石河子大学硕士学位论文抑制素βA亚基基因对绵羊繁殖性状的功能验证学位申请人陈宝麒指导教师赵宗胜教授申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称动物遗传育种与繁殖研究方向动物遗传资源利用与分子育种所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2013年06月FunctionalverificationofInhibinβAgeneforthesheepbreedingtraitsADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInFulfillme

2、ntoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByChenbaoqi(UtilizationofAnimalGeneticResourcesandMolecularBreeding)DissertationSupervisor:Prof.Zong-shengZhaoJune,2013本研究由以下项目资助：（1）科技部国际科技合作项目”绵羊非繁殖季节产羔性状的QTL定位及相关基因的分离“”项目编号：DF2007DFB30420（2）新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室开放

3、课题助项目编号：2011KLS06摘要抑制素βA亚基基因与绵羊的产羔数有一定关联，该基因在体内的生理作用主要是通过自分泌和旁分泌的形式选择性的抑制促卵泡素的合成和分泌，影响卵泡的生长发育和卵巢机能对动物发情和繁殖性状的调控。所以本研究以抑制素βA亚基作为候选基因探讨它与部分繁殖性状以及发情相关激素的关联。针对抑制素βA基因的作用，我们设计了以下几个实验：（1）采用聚合酶链式反应-单链构象多态技术（PCR-SSCP）检测该基因多态性分析其与产羔数的关联。结果表明，哈萨克羊、萨福克羊和德中美利奴羊外显子1的5’调控区引物0-2存

4、在多态性位点，有三种基因型。测序发现，基因型AA在5’调控区存在四个较为密集的碱基突变位点。显著性分析显示，哈萨克羊基因型AA比基因型AB和BB产羔数分别多0.20个(P<0.05)和0.26个(P<0.05)，德中杂交基因型AA比基因型AB和BB产羔数多0.25个(P<0.05)和0.34个(P<0.05)。结果表明：抑制素βA基因与哈萨克羊和德中杂交羊的产羔数存在一定关联。（2）抑制素βA基因干扰载体构建：首先根据GenBank上绵羊抑制素mRNA的序列设计干扰片段，通过酶切的方法和测序验证成功的构建了4个抑制素RNAi

5、质粒载体和1个空载体阴性对照。（3）在成功分离卵巢颗粒细胞并建立培养体系后，利用Lip2000介导转染细胞，通过荧光定量检测干扰前后抑制素βA基因表达量的变化。结果显示：四个干扰载体的干扰效率依次为34%、58%、39%和19%，其中干扰载体2对抑制素βA的沉默效果最好（4）通过卵巢注射干扰载体2（RNAi-2）的方法，检测干扰后绵羊的发情状况，以及血清中INHBA、FSH、LH和E2的含量。结果显示：在注射干扰载体后，处理组中一只绵羊有发情现象，血清中INHBA和FSH水平分别呈现明显的下降和上升波峰，LH和E2水平没有发

6、生明显变化。结果表明：INHBA基因对绵羊的发情性状具有一定的作用。这一结果，为绵羊繁殖性状和发情性状的研究奠定了良好的理论基础，同时也为RNAi应用在活体动物上研究基因功能方面提供了借鉴的思路。关键词：抑制素βA基因；产羔数；PCR-SSCP；RNA干扰；酶联免疫反应IABSTRACTINHBAgeneisrelatedtolittersizeofsheep.ThephysiologicaleffectofINHBAistoselectivelycontrollingthesynthesisandsecretionofFS

7、HthroughtheformofAutocrineandparacrine.Theeffectiononthegrowthanddevelopmentoffolliclesandfunctionofovariancanregulateanimaloestrusandreproductivetraits.Sointhisstudy,INHBAisselectedascandidategene.TheaimofourresearchistodiscusstherelationshipbetweenINHBAgeneandpar

8、tiallybreedingtraitsaswellasestrogenichormone.(1)WedetectedSinglenucleotidepolymorphismsofINHBAgenebyPCR-SSCP,andanalyzedtherelationshipbetweenpo