hpv58型病毒e1%5ee4蛋白b细胞线性表位的研究

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1、万方数据复旦大学硕士学位沦文HPV58型病毒EI^FA蛋白B细胞线性表位研究目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2第一章前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3一、人乳头瘤病毒概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、B细胞表位研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7三、本课题研究目的及研究路线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11第二章材料和

2、方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13一、材料与试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13二、研究方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18第三章实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30一、HPV58EI"E4蛋白B细胞表位生物信息学预测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30二、重组载体pRSET-A／E1^E4的构建与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36三、El^E4蛋白的原核表达、纯化和验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37

3、四、El^E4融合蛋白多克隆抗体的制备及特异性检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4l五、HPV58E1^E4线性B细胞抗原表位鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42第四章讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯S3致谢⋯·⋯·⋯⋯⋯⋯···⋯⋯⋯·⋯⋯⋯···⋯⋯·”-····-···”·”·”·”·”··”60万方数据复旦大学硕士学位论文HPV58型病毒E1nE4蛋白B细胞线性表位研究摘要宫颈癌是世界上第三常见的影响女性健康的

4、癌症，而高危型HPV是感染是宫颈癌的病因，其中以HPVl6型检出率最高，危害性也晟大。HPV58型作为15种高危型唧V的一种，虽然在世界范围内的感染率比HPVl6和HPVl8低，却存在较大的地区分布的差异，特别是在我国东部和南部部分地区及其他亚洲东部地区有着很高的感染率和致死率。El^E4是HPV一个早期非结构蛋白，它的表达关系到病毒的复制和侵袭，但其具体功能还未被人们完全了解，HPV58型El^E4蛋白的相关研究报道更是缺乏，准确获得其全部表位信息对宫颈癌诊断、疫苗和抗体药物的研发具有参考作用。我们

5、首先从生物信息学的角度对E1AE4蛋白进行了分析，El^E4是一个亲水性蛋白，内部有几个亲水性较高的区域，在溶液中不稳定。利用现有的B细胞表位预测算法(亲水性算法、可及性算法、可塑性算法、二级结构预测算法)和软件(ABCpred、BepiPred)对HPV58型El^E4蛋白B细胞线性表位进行预测，在对不同算法预测的B细胞线性表位结果进行整合时，我们发现这些结果有一定的一致性，分析出了该蛋白可能的B细胞线性表位所在区域，从整体上对HPV58型E1AE4蛋白B细胞表位有了大致认识。我们对HPV58型El

6、^E4蛋白进行了原核表达、纯化，并免疫三只雄性新西兰白兔，获得了其抗血清。随后，我们采用了改良的生物合成肽法，使用pXXGST-1短肽表达载体合成了l3条覆盖整个HPV58E1AE4蛋白并相互重叠9个氨基酸的15肽，利用制备的El^E4蛋白抗血清进行免疫印迹，综合三种抗血清的结果，我们鉴定出HPV58型E1AE4蛋白全部的B细胞线性表位共9个，集中在蛋白N端，并确定其中QSDDDSIYQTPETTP为HPV58El^E4蛋白线性B细胞优势抗原表位。我们首次对HPV58型El^E4蛋白全部B细胞线性表位

7、作了初步研究，研究结果对HPV相关诊断试剂、疫苗和抗体药物的研发具有一定意义。关键词：HPV58型，El^E4蛋白，生物合成肽法，B细胞线性表位，中图分类号：Q75万方数据复旦大学硕士学位论文HPV58型病毒El^E4蛋白B细胞线性表位研究Abs仃actHumanpapillomavirus(HPV)playsanecessary,thoughinsufficient,roleinthedevelopmentofcervicalcancer,whichisthetllirdmostcommoncanc

8、erinwomenworldwide，justfollowingbreastandcolorectalcancers．HPV16contributetomostcervicalcancers．WhileHPV58，asa“high-risk”type，haslowerprevalencethanHPVl6andI-IPVl8amongcervicalcancersacrosstheworld，thereisastrongbodyofevidencetos