小反刍兽疫病毒h蛋白的表达及其b细胞线性表位筛选

《小反刍兽疫病毒h蛋白的表达及其b细胞线性表位筛选》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：０９３５单位代码：１的６４密级：学号：１２７２０４０６么後朵！太葦学位论文小反当兽疫病毒Ｈ蛋白的表达及其Ｂ细胞线性表位筛选Ｅｘｒｅｓｓ－ｐｉｏｎａｎｄＳｃｒｅｅｎｉｎｇＢｃｅｌｌＬｉｎｅａｒＥｉｔｏｅｓｏｆｐｐＰＰＲＶＨｅｍａｌｕｔｉｎｉｎＰｒｏｔｅｉｎｇｇ研究生：高位相指导教师：张日月教ｊｆ合作指导教师：李震研究员申请学位口类级别：理学硕±专业名称：微生物学研究方向：微生物生理学所在学院

2、：生命科学学院答辩委员会主席：对二零一五年五月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加抖标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构一的学位或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。＞研究牛寐名；切或时间；年月＾日Ｊ关于论文使用授巧的说明目本人完全了解安徽农业大学有关

3、保留、使用学位论文的规定，Ｐ；学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，，允许论文被查阅和借阅可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意农业大学可Ｗ用不同方式在不同安徽上、。媒体发表传播学位论文的全部或部分内容保密的学位论文在解密后应遵此协议（守）＞生签杉；０／曰研名；為时间若年月究词乂＞主一第导师签名＝：年曰时间月＾摘要小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)感染山羊、绵羊等家养和野生小反刍动物的一种烈性、接触性、传染性疫病。2007年，在我国西藏

4、地区首次暴发小反刍兽疫。目前，我国已有20个省市相继发现了感染病例。探索有效的快速诊断和防治相结合的防治措施对于及时应对随时可能发生的小反刍兽疫疫情具有重要的意义。本研究利用蛋白质免疫印迹方法，以免疫的新西兰大白兔血清为一抗，通过覆盖H基因的重叠16肽片段与血清的特异性反应，鉴定小反刍兽疫病毒H蛋白的线性B细胞表位。本文主要进行了以下研究：1.PPRVH基因原核表达载体的构建以密码子优化的PestedespetitsruminantsvirusstrainChina/Tibet/Geg/07-30（FJ

5、905304）的H基因为模版，扩增H基因片段，构建了1个克隆载体pJET1.2/blunt-PPRV-H和3个表达载体pET28a-PPRV-H，pET30a-PPRV-H和pET32a-PPRV-H。2.His-H蛋白的表达与纯化对重组表达载体pET30a-PPRV-H的诱导表达条件进行优化，确定浓度为1mmol/LIPTG，诱导5h为最佳诱导表达条件。在此条件下，H蛋白主要以包涵体形式存在。通过尿素溶液洗涤包涵体，去除杂蛋白，纯化和浓缩目的蛋白，浓缩后的蛋白浓度最高为2mg/mL。3.免疫血清的制备

6、以纯化后的重组H蛋白免疫新西兰大白兔（0.5mg/只），分别在14d、28d、42d加强免疫一次，56d颈动脉采血收集血清。通过间接ELISA方法测定血清的滴度，1号，2号和3号兔子免疫血清的滴度分别达到1∶25600,1∶12800,1∶6400。从而说明获得的抗血清可以特异性识别重组表达的His-H蛋白。4.H蛋白B细胞线性表位的筛选设计并合成覆盖H基因16肽的基因序列，构建表达载体pXXGST-3-P76-（1F~75F），将重组质粒转化大肠杆菌BL21。以兔抗H蛋白抗血清作为一抗，利用蛋白质免疫

7、印迹来筛选重组表达的16肽片段，从而确定H蛋白的线性B细胞表位，结果共筛选出30个阳性的16肽。关键字：小反刍兽疫，小反刍兽疫病毒，H基因，H蛋白，线性B细胞表位筛选IAbstractPestedespetitsruminants(PPR)isanacute,contagiousdiseasecausedbypestedespetitsruminantsvirus(PPRV),whichinfectsmainlyhomebredandwildruminants,suchasgoatsandsheep.P

8、PRhasbeenreportedin20provincesinChinasinceitappearancedinTibetin2007.DevelopingprophylacticmeasuresconbinedrapiddiagnosiswithpreventionwillhaveagreatsignificanceforcopingwiththeunexpectedemergenceofPPRintime.Inthisstudy,We